Detección de marcadores diagnósticos de aspergilosis invasora

Abstract

La aspergilosis invasora (AI), es una infección grave que afecta principalmente a pacientes con neoplasias hematológicas con una marcada neutropenia, asociándose a una alta mortalidad. El objetivo de este estudio fue conocer el momento en que son detectados el ADN fúngico y galactomanano in vitro en muestras de suero y sangre humana inoculadas con esporas de Aspergillus fumigatus. Se tomaron muestras de sangre y suero de voluntarios sanos las cuales fueron inoculadas con 103 esporas/mL de A. fumigatus. La detección de ADN fúngico se hizo empleando el PCR en tiempo real y la determinación del antígeno de galactomanano se realizó utilizando el “kit” de Platelia Aspergillus (Bio-Rad). El ADN fúngico fue detectado en suero desde el día 0 (recién inoculado), mientras que en sangre se detectó a las 24 horas después de inocular. Se observó que la concentración de ADN fúngico fue directamente proporcional a la biomasa fúngica tanto en sangre como en suero. Por otra parte, el antígeno de galactomanano fue detectado 24 horas después de inocular ambas matrices, alcanzando un “plateau” a partir del cuarto día de crecimiento en suero. De acuerdo a estos resultados, ambos marcadores presentaron similar sensibilidad diagnóstica, sin embargo hay que considerar que el PCR en tiempo real podría tener mejor sensibilidad en suero, ya que es capaz de detectar la presencia de ADN de A. fumigatus desde el momento que se realiza el inóculo.

Invasive aspergillosis (IA) is a serious infection that primarily affects patients with haematological malignancies with a marked neutropenia and is associated with high mortality. The aim of this study was to determine the time in which fungal DNA and galactomannan are detected in vitro in serum and human blood samples inoculated with spores of Aspergillus fumigatus. Blood and serum samples of healthy volunteers were inoculated with 103 spores/mL of A. fumigatus. Fungal DNA detection was done using real time PCR and galactomannan antigen determination was performed using the Platelia Aspergillus assay (Bio-Rad). Fungal DNA was detected in serum from day 0 (freshly inoculated), while in blood was detected at 24 hours after inoculation. It was noted that the concentration of fungal DNA was directly proportional to the fungal biomass in both blood and serum. Moreover, the galactomannan antigen was detected 24 hours after inoculation in both matrices, reaching a plateau after the fourth day of growth in serum. According to these results, both markers showed similar diagnostic sensitivity, however, it is necessary to consider that real time PCR could have a better sensitivity in serum, since it is able to detect the presence of A. fumigatus DNAfrom the moment that is realized the inoculum.