Efecto de la activación β-adrenérgica en ovario de rata durante el período de subfertilidad

Abstract

La postergación de la maternidad hacia el periodo de subfertilidad es un tema de salud pública relevante, los mecanismos que operan en esta etapa reproductiva no han sido descritos. Evidencias de nuestro laboratorio, obtenidas en ratas Sprague Dawley, indican que la actividad nerviosa simpática aumenta espontáneamente durante el periodo de subfertilidad, lo que conduce a la formación y/o mantención de quistes foliculares, contribuyendo al cese de la función ovárica. El aumento del tono adrenérgico en ovario de rata durante el periodo óptimo de fertilidad (3-7 meses de edad) altera el desarrollo folicular y podría conducir a la formación y mantención de quistes foliculares, lo que podría acelerar el envejecimiento reproductivo. Para estudiar esta posibilidad, se postula la hipótesis que la “La activación β-adrenérgica inducida por la administración de Isoproterenol produce un adelanto del envejecimiento ovárico de la rata durante el periodo de subfertilidad”. Para desarrollar esta hipótesis se plantea el objetivo general: Estudiar el efecto del aumento de la actividad ß-adrenérgica en el desarrollo folicular ovárico de rata durante el período de fertilidad y subfertilidad. Para ello, se utilizaron ratas Sprague Dawley de 6, 8 y 10 meses de edad. Se simuló un tono adrenérgico aumentado mediante la administración vía subcutánea de Isoproterenol, un agonista β adrenérgico. Los animales fueron eutanasiados a los 20 días post-inyección; los ovarios izquierdos fueron fijados en bouins y teñidos con hematoxilina-eosina para el análisis morfológico, se colectó suero para la determinación de las hormonas esteroidales y Antimülleriana por enzimo inmuno ensayo. La noradrenalina y el 3- metoxi-4-hidroxifenilglicol se midieron por cromatografía líquida de alto rendimiento. En animales controles que ingresan a la etapa de subfertilidad, se observó una disminución en el contenido de hormonas esteroidales séricas (progesterona, androstenediona, y estradiol), hormona antimülleriana, y ciclos estrales. El análisis morfológico mostró en este grupo de animales, un aumento de las estructuras atrésicas y quísticas, indicando el deterioro de la función ovárica en esta etapa. La administración de Isoproterenol para activar la vía β-adrenérgica en ratas tuvo diferentes efectos dependiendo del periodo reproductivo. En ratas fértiles de 6 meses de edad se observó un aumento en la atresia de folículos preantrales, antrales, y folículos tipo III. Estos resultados coinciden con una disminución de las hormonas esteroidales como progesterona, androstenediona y estradiol, y número de cuerpos lúteos. Durante el inicio del periodo de subfertilidad en ratas de 8 meses de edad no fue posible observar cambios significativos inducidos por la activación β adrenérgicas. Mientras que en ratas en periodo sub-fértil de 10 meses de edad, se observó que un aumento de folículos secundarios sanos, aumento de los niveles séricos de las hormonas anti-Mülleriana y androstenediona, aumento en la cantidad de folículos tipo III. Sin embargo, se observó una menor cantidad de quistes foliculares y un aumento en la cantidad de cuerpos lúteos. En conclusión, el presente trabajo sugiere que la sobre-estimulación β-adrenérgica afecta la función ovárica, sugiriendo un adelanto del envejecimiento ovárico en ratas fértiles y contrario a lo propuesto, se observó un grado de mejoramiento de la función ovárica en ratas en periodo sub-fértil, ambos resultados apoyan la idea que el SNS tiene un rol importante en la función ovárica.

The postponement of motherhood to the period of subfertility is an important public health theme; the mechanisms involved in this reproductive period have not been described. Evidence from our laboratory, obtained in Sprague Dawley rats indicate that sympathetic nerve activity increases spontaneously during the period of subfertility, facilitating the formation and / or maintenance of follicular cysts, contributing to the cessation of ovarian function. The increased adrenergic tone in rat ovary during the optimum period of fertility (3-7 months old) alters follicular development and could allow the formation and maintenance of follicular cysts and could accelerate reproductive aging. To study this possibility, the hypothesis postulated is "The β-adrenergic activation by Isoproterenol produced an acceleration of rat ovarian aging during the subfertility period." To test this hypothesis, the following objective was proposed: To study the effect of increased ß-adrenergic activity on rat ovarian follicular development during the fertility and subfertility period. For this, Sprague-Dawley rats of 6, 8 and 10 months old were used. In our animals’ model, Adrenergic tone enhanced was simulated by Isoproterenol administration, a β adrenergic agonist. Animals were euthanized at 20 days post-injection; To morphological analysis, the left ovaries were fixed in Bouins and stained with hematoxylin-eosin. To determinate steroid and anti-Müllerian hormone by enzyme immunoassay, of serum was collected. Noradrenaline and 3-methoxy-4- hydroxyphenylglycol was measured by high performance liquid chromatography. In control animals that initiate the stage of subfertility, it was observed a decrease in both, the serum steroid hormones (progesterone, androstenedione, and estradiol), and AMH content, accompanied of estrous cyclicity loss. The morphological analysis showed an increased in atretic and cystic structures, suggesting impairment of ovarian function at this stage. Isoproterenol administration to activate the β adrenergic pathway in rats had different effects depending on the reproductive period. In 6 months old rats was observed an increase in both preantral and antral follicular atresia, and also an increase number of type-III follicles. In this animal group, the result showed a decreased in steroid hormones such as progesterone, androstenedione and estradiol, and number of corpora lutea. In rats 8 months old was not possible to observe significant changes. While that 10 months old rat was observed an increased secondary follicles number, serum levels of the AMH and androstenedione hormones, also presented an increased amount of type-III follicles. However, a smaller amount of follicular cysts and an increase in the number of corpora lutea was observed. In conclusion, the present work suggests that over stimulation β-adrenergic affects ovarian function, suggesting an accelerate of ovarian aging in fertile period and contrary to thought, a degree of improvement of ovarian function in rats in subfertile period was observed, both results support the idea that the sympathetic nerves system has an important role in ovarian function.