Estrés oxidativo y apoptosis de los telocitos y miofibroblastos en la placenta de mujeres con preeclampsia

Abstract

La preeclampsia (PE) es una alteración multisistémica específica del embarazo, asociada a hipertensión, proteinuria y edema. Su etiología es aún desconocida, aunque se relaciona con una placentación deficiente que conlleva al desarrollo de un estrés oxidativo (EO) exagerado en el órgano, acompañado de una mayor apoptosis. A la fecha y en relación a la placenta, es importante destacar que los estudios de PE han sido enfocados exclusivamente al efecto del EO y de la apoptosis que experimenta el trofoblasto, sin embargo actualmente se ha descrito un nuevo tipo celular en el estroma de las vellosidades coriónicas y se les ha denominado Telocitos (TC). Sobre la base de esto último, esta investigación se enfoca en el estudio de estas nuevas células en los casos de PE. Los TC presentan una ubicación estratégica entre los miofibroblastos (MF) y la capa muscular de los grandes vasos sanguíneos de las vellosidades coriónicas, postulándose que intervienen como una tríada funcional en la regulación del tono vascular fetal y de la contracción-relajación de las vellosidades en cámara hemática, por ende regulan el intercambio metabólico madre/feto. Al ser la placenta un órgano no inervado, se postula que los TC actuarían como marcapaso o transductor de señales tanto para las células musculares lisas de los vasos sanguíneos fetales como para los MF, ambos presentes en el estroma vellositario. Bajo la hipótesis que placentas provenientes de mujeres con PE presentan mayor EO y apoptosis evidenciado por marcadores inmunohistoquímicos, el objetivo del estudio fue determinar inmunohistoquímicamente en TC y MF la presencia de residuos de nitrotirosina como marcador de EO y de caspasa 3 activada como marcador del grado de apoptosis en estas células, posteriormente se analizó la relación existente entre estos parámetros inmunohistoquímicos con la edad gestacional, peso del recién nacido (RN) y edad materna. Se reunieron muestras de placenta (lado fetal) de madres preeclampsticas (n=12) y normotensas (n=11). La aplicó la inmunoperoxidasa individualmente en las secciones de tejido. La inmunotinción se realizó utilizando un kit de estraptividina (DAKO) de acuerdo a las indicaciones del fabricante. Se utilizó el Ac anti-nitrotirosina A (Ac policlonal de conejo AB5411 Chemicon) en dilución 1:100 y el Ac anti-caspasa 3 activada Ab (Ac monoclonal CPP32 Novocastra), dilución 1:50, usando diaminobenzidina como cromógeno. La intensidad inmunohistoquímica de la reacción fue evaluada al microscopio óptico (Axiolab, Zeiss). La intensidad de la tinción inmunohistoquímica se midió utilizando un score semi cuantitativo. Se seleccionaron dos campos aleatoriamente de cada paciente, fueron evaluados por dos examinadores diferentes que fueron cegados a la información clínica. El puntaje semi cuantitativo de la intensidad de inmunotinción se evaluó mediante la prueba de Chi- cuadrado de Pearson para los diferentes grupos. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas con un p< 0,05. Como resultados se observó que los TC y MF de los casos de PE aunque si bien mostraron una mayor expresión de residuos de nitrotirosina y caspasa 3 activada respecto al grupo control, las diferencias no fueron estadísticamente significativas. A excepción de caspasa 3 activada para MF, único parámetro que presentó diferencias significativas entre los grupos. Al relacionar la expresión de residuos de nitrotirosina y caspasa 3 activada con las variables edad gestacional y peso del RN los resultados no mostraron diferencias significativas entre los grupos, pero independiente de la característica clínica, todas las placentas fueron positivas a los anticuerpos inmunohistoquímicos utilizados Proyecto Fondecyt 1090245.

Preeclampsia (PE) is a specific multisystemic alteration of pregnancy, associated with hypertension, proteinuria and edema. Its etiology is still unknown, although it is related to a deficient placentation that leads to the development of exaggerated oxidative stress (OE) in the organ, accompanied by a greater apoptosis. To date and in relation to the placenta, it is important to emphasize that PE studies have been exclusively focused on the effect of OE and the apoptosis that the trophoblast undergoes, nevertheless a new cellular type in the stroma of the chorionic villi and have been termed Telocytes (TC). On the basis of the latter, this research focuses on the study of these new cells in cases of PE. The TCs present a strategic location between the myofibroblasts (MF) and the muscular layer of the great blood vessels of the chorionic villi, postulating that they operate as a functional triade in the regulation of the fetal vascular tone and the contraction-relaxation of the villi in the blood chamber, therefore they regulate the mother / fetus metabolic exchange. Since the placenta is a non-innervated organ, it is postulated that TC would act as a pacemaker or signal transducer for both the smooth muscle cells of fetal blood vessels and MF, both present in the villous stroma. Under the hypothesis that placentas from women with PE present higher OE and apoptosis evidenced by immunohistochemical markers, the objective of the study was to determine immunohistochemically in TC and MF the presence of nitrotyrosine residues as an OE marker and activated caspase 3 as a marker of the degree of apoptosis in these cells. Subsequently we analyze the relationship between these immunohistochemical cells parameters with gestational age, newborn weight (NB) and maternal age. Placenta samples (fetal side) were collected from preeclamptic (n=12) and normotensive patients (n=11). Standard immunoperoxidase techniques were individually applied in the tissue sections. Immunostaining was performed using streptavidin biotin kit (DAKO) according to manufacturer’s directions. The anti-nitrotyrosine A (Rabbit polyclonal Ab AB5411 Chemicon) was used in a 1: 100 dilution and the activated anti-caspase 3 Ab (monoclonal Ac CPP32 Novocastra), dilution 1:50, using diaminobenzidine as the chromogen. The immunohistochemical intensity of the reaction was evaluated by light microscopy (Zeiss Axioplan 2). The intensity of the immunohistochemical staining was measured using semi quantitative scores. Two randomly selected fields from each patient were evaluated by two different examiners who were blinded to the clinical information. The semi quantitative scoring of immunostaining intensity were assessed by the Pearson chi 2 test for differences between groups. Differences were considered statistically significant at p < 0.05. Chi-square statistic with p <0.05. As results it was observed that the TC and MF of the PE cases although they showed a greater expression of nitrotyrosine residues and activated caspase 3 than the control group, the differences were not statistically significant. Except for caspase 3 activated for MF, the only parameter that presented significant differences between groups. When the expression of nitrotyrosine and caspase 3 activated residues was related to the variables gestational age and NB, the results did not show significant differences between the groups, but independent of the clinical characteristic, all placentas were positive to the immunohistochemical antibodies used. Project Fondecyt 1090245.