Niveles del microRNA-23b en la progresión del cáncer ovárico epitelial y el efecto de NGF en los niveles de este microRNA en líneas celulares de epitelio ovárico

Abstract

El cáncer ovárico epitelial (COE) es la primera causa de muerte por neoplasias ginecológicas en países desarrollados como Canadá y EE.UU. En el caso de Chile, es la segunda causa de muerte por neoplasias ginecológicas. Este cáncer se caracteriza por ser de diagnóstico tardío, debido a su sintomatología poco específica y poseer una pobre respuesta al tratamiento. Debido a lo anterior, es importante entender los mecanismos tanto de la génesis como del desarrollo de esta neoplasia. En COE se ha encontrado que NGF tiene un rol importante, estimulando principalmente, la proliferación y la angiogénesis de manera directa e indirecta. Además, estudios en nuestro laboratorio han reportado que a medida que progresa el cáncer ovárico epitelial hay un aumento en los niveles de VEGF, NGF, receptor TRKA, su forma activa (p-TRKA) y c-Myc, entre otros. Actualmente, la literatura está describiendo otras moléculas involucradas en la carcinogénesis, los microRNA (miRNA o miR). Son pequeños RNA no codificantes de alrededor de 22 nucleótidos, capaces de regular la expresión de genes, al impedir la traducción del mRNA. Están involucrados en varios procesos biológicos como el desarrollo, la diferenciación, la apoptosis y la proliferación, por lo que los miRNA también tienen un importante rol en la oncogénesis, debido a que pueden actuar como supresores de tumores o como oncogenes. Uno de estos miRNA es miR-23b, el cual se ha descrito estar disminuido en varios tipos de cáncer, como lo son el cáncer de próstata, el cáncer de vejiga y el cáncer ovárico entre otros. Hipótesis: En el cáncer ovárico epitelial el aumento en los niveles de NGF, produce una disminución en los niveles del microRNA 23b-3p. Objetivos: Evaluar los niveles del miR-23b-3p en muestras de tejidos ováricos y si este se encuentra disminuido por efecto de NGF en líneas celulares. Metodología: En los experimentos ex vivo, se evaluaron los niveles del miR-23b de las muestras de tejido (OVI, Tumores y COE) por RT-PCR. En cuanto a los experimentos en líneas celulares, se evaluó el efecto de NGF sobre los niveles del miR-23b, al estimular directamente con NGF. Para evaluar si NGF inhibe a miR-23b, se utilizó un anticuerpo anti-NGF y un inhibidor de su receptor TRKA. Resultados: Los niveles del miR-23b en los tejidos ováricos disminuyen en los grupos de tumores y COE al compararlos con los tejidos ováricos normales inactivos. En las líneas celulares, al estimular con NGF se observó una disminución en los niveles del miRNA-23b y el efecto de NGF fue posteriormente revertido al inmunobloquear NGF y al inhibir su vía de señalización con un inhibidor de TRKA. Proyecciones: Para lograr entender mejor los mecanismos involucrados en este cáncer sería interesante evaluar otras moléculas que podrían estar modificando los niveles del miR-23b, tales como c-Myc y COX-2, ya que en otros tejidos se ha encontrado que alteran los niveles de este miR. También sería importante encontrar los blancos de este miRNA

Epithelial ovarian cancer (COE) is the leading cause of death from gynecological malignancies in developed countries such as Canada and USA. In the case of Chile, it is the second cause of death due to gynecological neoplasias. This cancer is characterized by late diagnosis, due to its poorly specific symptoms and poor response to treatment. For these reasons, it is important to understand the mechanisms of both the genesis and development of this neoplasm. It is a company that is dedicated mainly to the generation of information and indirect. In addition, studies in our laboratory have reported that epithelial ovarian cancer progression there is an increase of VEGF, NGF and TRKA receptor levels, its active form (p-TRKA), and also c-Myc, among others. Currently the literature is describing another molecules involved in carcinogenesis, the microRNA (miRNA or miR). They are small non-coding RNAs of about 22 nucleotides, capable of regulating gene expression, by preventing translation of mRNAs. They are involved in several biological processes such as development, differentiation, apoptosis and proliferation, so miRNAs also play an important role in oncogenesis, because they can act as tumor suppressors or as oncogenes. One of these miRNAs is miR-23b, which has been reported to be decreased in several types of cancer, such as prostate cancer, bladder cancer and ovarian cancer among others. Hypothesis: In epithelial ovarian cancer there is an increase in NGF levels, which causes a decrease of miR23b-3p levels. Objectives: To evaluate miR-23b-3p levels in samples of ovarian tissues and to evaluate whether NGF diminish miR-23b levels in epithelial ovarian cell lines. Methods: In ex vivo experiments, miR-23b-3p levels of tissue samples (OVI, Tumors and COE) were evaluated by RT-PCR. Epithelial ovarian cell lines were used to evaluate the effect of NGF on miR-23b levels. This effect was also blocked when an antibody anti-NGF and an inhibitor of TRKA receptor were used. Results: MicroRNA-23b levels in ovarian tissues were reduced in the tumors and COE groups when were compared to the normal ovarian tissues or control group. In epithelial ovarian cell lines, miRNA-23b levels decreased by NGF stimulation and this effect was subsequently reversed by NGF immunoblocking and when a specific TRKA inhibitor was used to inhibit the signaling pathway through TRKA. Projections: In order to better understand the mechanisms involved in this cancer, it would be interesting to evaluate molecules that could be affecting miR-23b levels such as c-Myc and COX-2, because in other type of cancer these molecules change miR-23b levels and also it will be important to know which are the target of this miR