Diversidad genética generada en una población clonal de Vibrio parahaemolyticus causante de los brotes de diarrea ocurridos en Chile en 1998 y 2004

Abstract

V. porahaemolyticus es una bacteria marina capaz de provocar gastroenteritis en humanos. Es responsable de la mayoría de las diarreas ocasionadas por consumo de mariscos crudos. Las diarreas por V. parahaemolyticus eran poco frecuentes y solo se observaban esporádicamente en el norte de Chile, durante el verano. El primer gran brote de diarrea por V. parahaemolytlczs registrado ocurrió en el Norte, principalmente en Antofagasta y alrededores en 1998, con aproximadamente 300 casos clínicos registrados. A éste le han seguido dos brotes en el Sur. El primero principalmente en Puerto Montt y alrededores con cerca de 3000 casos clínicos, y el segundo principalmente en la misma región pero que se extendió por todo Chile ocasionando 10.000 casos, aproximadamente. Las bacterias aisladas de casos clínicos del brote en Antofagasta y del primero en Puerto Montt corresponden al denominado complejo clonal pandémico que ha causado la mayoría de los brotes en el Sudeste asiático a partir de 1996. El complejo clonal pandémico corresponde a un grupo de bacterias patógcnas que compafen una serie de características, entre las que se incluye el serogrupo 03:K6, la presencia de una hemolisina TDH, de un único marco de lectura abierto ORF8, de una secuencia diferente al interior del operon foxR§ denominada toxRS/new y la ausencia de 1'Rl'l acornpañado de un negativo test de ureasa. Pero quizás lo que mejor los idenlifica son los patrones muy similares obtenidos por amplificación con partidores arbitrarios (AP-PCR) y de los lragmentos de restricción obrenidos por PFGE. Su naturaleza clonal está también demc¡strada por análisis de las secuencias de varios loci (multilocus sequence typing, N,ILST) Aunque los esh.rdios realizados en distintos aislados del complejo clonal del Sudeste asiático muestran una g¡an homogeneidad entre aislados, ¡ecientemente se ha mostrado cierto grado de diversidad al interior de este Complejo clonal, como lo es el surgimiento de nuevos serogrupos distintos al 03:K6, como O4:K12, O4:K68, O1: KUT, y la ausencia de ciertas propiedades comunes, como la pérdida de ORF8. Las bacterias aisladas de los b¡otes en Chile (Antofagasta- 1998 y Puerto Montt-2004) pertenecen al Complejo clonal pandémico y constituyen un grupo homogéneo, indistinguible por las propiedades descritas anteriormente. Este trabajo consistió en el estudio del grado de diversidad que se ha generado al interior del Complejo en el tiempo transcurrido desde su arribo a Chile, estudiando un grupo de aislados, tanto clínicos como de mariscos, obtenidos durante los brotes ocurridos en Chile en 1998 y 2004. Se incluyeron aislados del Complejo clonal de los brotes ocurridos en Antofagasta- 1998 y Puerto Montt-2004, con la expectativa de que las posibles diferencias entre ellos podrían indicar su posible origen y dispersión desde su ar¡ibo a Chile. Se estudió la diversidad en un grupo de 66 aislados clonales mediante el patrón de espaciadores 165- 23S rDNA, AP-PCR, patrón por R-FLP-PFGE y propiedades metabólicas. Previamente y con el objeto de aumentar el número de aislados clonales, de diferente origen geográfico y temporal al de los aislados clonales disponibles, se analizaron otros 40 aislados obtenidos tanto de casos clínicos como de mariscos del b¡ote ocurrido en el norte en 1998, por las características clásicas que definen clonalidad antes mencionadas. De este estudio se obtuvieron 18 aislados clínicos clonales de un total de 20 muestras clínicas y 5 aislados de mariscos clonales de un total de 20 muestras de mariscos que contenían Z parahaemolyticas. Estos aislados lunto a los obtenidos anteriormente conformaron los 66 aislados esfudiados. xi El análisis por espaciadores 165-235 rDNA no permitió distinguir dife¡encias entre aislados clonales. Por otro lado el a¡rálisis por AP-PCR permitió observar 3 grupos y, fina.lmente, el anáisis por RFLP-PFGE permitió observar 5 grupos. En este estudio se incluyeron adernás aislados clonales del Sudeste asiático con el objeto de explorar el posible origen de las cepas clonales chilenas. En general, los resultados indicaron que el conjunto de los aislados chilenos constituyen un grupo mayoritario conformado también por la mayoría de los aislados asiáticos estudiados. Los demás están formados por aislados asiáticos y chilenos. De los grupos chilenos se destacan, dos formados por aislados clonales de mariscos, el otro por solo dos aislados de Chile, uno proveniente de Coquimbo-1998 y el otro de Puefo Montl2004 y un último grupo conformado por un aislado que presenta un fragmento adicional de 324 kb . Las propiedades metabólicas estudiadas en aislados representativos del conjunto de aislados clonales chilenos permitieron reconocer 3 grupos que se distinguen por la presencia o ausencia de dos enzimas: Lisina descarboxilasa y Omitina descarboxilasa. Estas propiedades permitieron agmpar a los aislados de mariscos con la cepa tipo VpKX, no así la mayoría de los aislados clinicos. La diversidad encontrada en los aislados chilenos pertenecientes al Complejo clonal pandémico es menor que la encontrada en los del Sudeste asiático. Esta diversidad podría haberse generado en Chile a partir de una sola cepa llegada al país solo dos años después de su aparente surgimiento en el Sudeste asiático en 1996. No fue posible diferenciar entre los aislados pertenecientes a los brotes del norte de Chile de los del sur por los análisis realizados. Pero la presencia de aislados con el mismo patrón por PFGE en el norte y el sur, en distintos tiempos sugiere que las mismas bacterias llegadas al Norte del país podrían haberse propagado al Sur. xii En todos los analisis la mayoría de los aislados chilenos agruparon con el aislado del Sudeste asiático VpKX, sugiriendo que este podría constituir el gnrpo original.