Estudio genético de pycnoporus sanguineus var. Osorninus, un basidiomicete ligninolitico

Abstract

Pycnoporus sanguineus var. osorninus, hongo filamentoso que habita en los bosques nativos del sur de Chile, es un Hymenomycete de la familia Polyporaceae que produce pudrición blanca en la madera. El estudio de su ciclo de vida revela abundante producción de artroconidios uninucleados y binucleados a partir de hifas fértiles. Su cultivo en medios líquidos con sulfato de amonio, como fuente de nitrógeno, incrementa notoriamente la producción de clamidosporas. Los basidiocarpos obtenidos en cultivos de laboratorio producen basidiosporas en abundancia. A partir de estas fructificaciones es posible obtener micelios monospóricos, los cuales, cruzados entre sí, permitieron la identificación de los polos sexuales de esta cepa. Su forma heterotálica tetrapolar depende de dos loci determinantes del tipo de apareamiento. Mediante el tratamiento de conidios con luz ultravioleta se obtuvieron diferentes mutantes, tres auxotróficos, uno de crecimiento colonial y cinco con diferencias en su actividad de fenoloxidasas. Después de reiterados cruzamientos de estas mutantes con la cepa silvestre, se seleccionaron colonias que presentaban el fenotipo mutante, el cual es estable genotípica y fenotípicamente. La mutación que afecta la producción de fenoloxidasas extracelulares presenta efectos pleiotrópicos que afectan la cinética de excreción de proteínas. Ensayos de actividad de lacasa in situ, así como también la cinética de actividad de lacasa intracelular y extracelular en la cepa silvestre y en una de las cepas mutantes para fenoloxidasa, sugieren que la mutación estaría afectando a esta enzima.

Pycnoporus sanguineus var. osorninus, a filamentous fungus inhabiting native forests in southern Chile, is a Hymenomycete of the Polyporaceae family that participates in the process of formation of white rot wood. The study of its life cycle shows an intense production of uninucleate and binucleate arthroconidia from fertile hyphae. The production of chlamydospores increase notoriously in liquid media with ammonium sulphate as a nitrogen source. Fructification of cultures held in laboratory produced abundant basidiospores. Monosporic mycelia were obtained from these fruitbodies. The mating of them, allowed the determination of the sexual poles of this strain. The heterothallic and tetrapolar characters depend of two loci controlling the mating-type of this organism. Irradiation of conidia with ultraviolet light allowed the obtention of different mutants: auxotrophic, colonial growth and deficient in phenoloxidase activities. The mutant phenotypes, were selected after consecutive matings of the mutants with the wild type strain. The mutant strains exhibit genotypic and phenotypic stability. The mutation affecting the production of extracellular phenoloxidases has pleitropic effects, which is made evident in a different kinetic for protein excretion. Tests of enzymatic activity of laccase in situ as well as the kinetic of intracellular and extracellular laccase activity in the wild type strain and in one of these mutant strains suggest that the mutation would affect this enzyme.