Efecto de la sobreexpresión de miR-145 más miR-23b, en la proliferación, migración e invasión de líneas celulares de cáncer ovárico epitelial : bases para el desarrollo de una nanoformulación

Abstract

Introducción: El cáncer ovárico epitelial (COE) es una de las neoplasias ginecológicas más letales. Este se caracteriza por la aparición tardía e inespecífica de síntomas y por una quimiorresistencia en estadios avanzados. El factor de crecimiento nervioso (NGF por sus siglas en inglés) y su receptor de alta afinidad TRKA se encuentran sobre expresados en COE promoviendo la proliferación, migración y angiogénesis a través de la expresión de proteínas oncogénicas, las cuales a su vez están reguladas por microRNAs (miRs). Los miRs corresponden a RNAs no codificantes cuya función es impedir la traducción de RNAs mensajeros (mRNAs). Los miRs participan en procesos celulares como la proliferación celular, migración e invasión, funcionando ya sea como oncogenes o supresores de tumores. En COE, se ha descrito que ocurre una disminución de diferentes miRs supresores de tumores, entre ellos miR-145 y miR-23b. Nuestro grupo ha encontrado que miR-145 y miR-23b están implicados en la progresión de COE en un mecanismo regulado por NGF. Los mRNAs blancos de miR-145 incluyen a ABCB1 (un transportador de eflujo de drogas) y c-MYC (factor transcripcional que induce proliferación celular). Se ha propuesto a miR-23b como un modulador del ciclo celular, así como también de la quimiorresistencia al actuar sobre ZEB1 (factor transcripcional que induce transición epitelio mesénquima, TEM). Hipótesis: “La sobreexpresión de miR-145 más miR-23b disminuye la proliferación, migración, invasión y niveles proteicos de c-MYC, ZEB1 y ABCB1 en líneas celulares de cáncer ovárico epitelial” Objetivo general: “Determinar si la co-transfección de miR-145 y miR-23b disminuye la proliferación, migración, invasión y los niveles proteicos de c-MYC, ZEB1 y ABCB1 en líneas celulares de cáncer ovárico epitelial”. Metodología: Se utilizaron tres líneas celulares de COE, las que se co-transfectaron con miR-145 más miR-23b. Posteriormente, se evaluaron los niveles de miRs mediante Real Time-PCR para controlar el proceso de transfección. Los ensayos de proliferación se realizaron mediante conteo celular e inmunofluorescencia de Ki-67, mientras que los ensayos de migración e invasión se realizaron con insertos transwell sin y con matrigel respectivamente. Los niveles de proteínas c-MYC, ZEB1 y ABCB1 se midieron a través de la técnica de Western blot. Resultados: Al co-transfectar con miR-145 más miR-23b en células A2780, SKOV-3 y OV-90, se obtuvo una disminución en la proliferación, migración e invasión celular y también en los niveles proteicos de c-MYC, ZEB1 y ABCB1. Conclusión: La co-transfección de miR-145 más miR-23b disminuye la proliferación, migración, invasión; así como también disminuyen la abundancia de proteínas implicadas en estos procesos y en quimiorresistencia en células de COE. Estos resultados sugieren la importancia de los miRs como posibles agentes terapéuticos y sientan las bases para el desarrollo de futuras terapias dirigidas que busquen reducir los efectos secundarios, detener la progresión del COE y reducir la quimiorresistencia

Introduction: Epithelial ovarian cancer (EOC) is one of the most lethal gynecological neoplasms. This is characterized by the late diagnosis, nonspecific symptoms and chemoresistance in advanced stages. Nerve growth factor (NGF) and its high-affinity receptor TRKA are overexpressed in EOCs, promoting proliferation, migration, and angiogenesis through the expression of oncogenic proteins, which are regulated by microRNAs (miRs). miRs correspond to non-coding RNAs whose function prevents the translation of messenger RNAs (mRNAs). miRs participate in cellular processes such as cell proliferation, migration, and invasion, functioning as oncogenes or tumor suppressors. In COE, it has been described a decrease of different tumor suppressor miRs, including miR-145 and miR-23b. Our group has found that miR-145 and miR-23b are involved in EOC progression in a mechanism regulated by NGF. Target mRNAs for miR-145 include ABCB1 (a drug efflux transporter), and c-MYC (a transcription factor that induces cell proliferation). Besides, miR-23b has been proposed as a principal modulator of the cell cycle and chemoresistance by acting on ZEB1 (a transcriptional factor that causes the epithelial-mesenchymal transition, TEM). Hypothesis: “The overexpression of miR-145 plus miR-23b decreases the proliferation, migration, invasion, and protein levels of c-MYC, ZEB1, and ABCB1 in epithelial ovarian cancer cell lines”. General objective: “To determine if the co-transfection of miR-145 and miR-23b decreases the proliferation, migration, invasion, and protein levels of c-MYC, ZEB1, and ABCB1 in epithelial ovarian cancer cell lines”. Methodology: Three EOC cell lines were used, which were co-transfected with miR-145 plus miR-23b. Subsequently, the levels of miRs were evaluated by Real Time-PCR to control the transfection process. Proliferation assays were performed by cell count and Ki-67 immunofluorescence, while migration and invasion assays were performed with transwell inserts without and with matrigel, respectively. The levels of c-MYC, ZEB1, and ABCB1 proteins were measured using the Western blot technique. Results: When co-transfecting with miR-145 plus miR-23b in A2780, SKOV-3, and OV-90 cells, a decrease in cell proliferation, migration, and invasion was obtained, as well as in c-MYC protein levels, ZEB1 and ABCB1. Conclusion: Co-transfection of miR-145 plus miR-23b reduces proliferation, migration, and invasion, as well as decreases the abundance of proteins involved in these processes and chemoresistance in COE cells. These results suggest the importance of miRs as potential therapeutic agents and lay the groundwork for future targeted therapies that seek to reduce side effects, halt EOC progression, and reduce chemoresistance