Estandarización de un elisa de captura para la medición de la forma soluble del receptor tipo toll 2 en plasma humano

Abstract

Ios receptores tipo Toll (mts) son proteínas transmembrana capaces de unir patrones moleculares acostados a macroorganismos. ha activación de estos receptores conduce al desarrollo de la respuesta Inmune innata al desencadenar la produccion de citoquinas pro-inflamatorias tales como TNF-or. IL-6 e lL-12. Todos los TLRs tienen un dominio intracelular de señalización TIR IToll-IL-1R domain) presente también en las proteínas de la familia del receptor de lL-1 (lL-lR). ha especialidad de los TLRs por sus ligandos y el reclutamiento de diferentes proteínas intracelulares que activan la vía de señalización posibilitan variadas respuestas inflamatorias de acuerdo con la naturaleza del patógeno. Sin embargo. Ia respuesta inflamatoria inducida puede llegar a ser destructiva para el propio huésped, lo que subraya fa importancia de mecanismos de regulación negativa de la misma. las formas solubles de algunos TLRs (sTLR2, sTLR4) han sido identificadas. Estas formas solubles son incapaces de gatillar cascadas de serialización intracelulares y pueden atenuar la respuesta inmune tras competir con sus homólogos de membrana por Bus ligandos. Ia capacidad de las formas de sTLR2 de atenuar la producción de citoquinas proinflamatorias se ha demostrado in vitro. La medición de los niveles de §TLR2 en enfermedades directamente asociadas al desequilibro de la respuesta inflamatoria (enfermedades inflamatorias intestinales , artritis reumatoides, lupus, etc.) puede esclarecer el papel de sTLR2 en la modulaclon de la respuesta inmune. En base a estos antecedentes el objetivo general de este seminario de titulo de biotecnología fue establecer las condiciones para desarrollar un ELISA de captura para sTLR2. Log objetivos específicos fueron: 1. Establecer las condiciones necesarias para la medict6n de sTLR2 en plasma por ELISA de captura. y 2. Diseñar herramientas que permitan el desarrollo de una proteína recombinante de TLR2 humano para ser utilizada en la curva de calibración del ELISA de captura. Se logro el desarrollo del ELISA de captura con una curva estándar entre 20 y 320 ng/mL de proteína recombinante de TLR2 (rTLR2). En plasma, se observ6 interferencia en la deteccl6n de rTLR2, que subraya la necesidad de aplicar un tratamiento previo a las muestras para lograr medir sTLR2 endogeno. Por .otro lado. se ampllfic6 por PCR la secuencia codificante de TLR2 humano. con los sitios de restricción necesarios para su incorporación en el vector de expresión bacteriano PET-2l(a)+. El ensayo logrado durante este seminario permitirá la. medicion de sTLR2 en enfermedades inflamatorias a autoinmunes para ampliar la comprensión de estas enfermedades y, con esto, desarrollar terapias de nueva generaclon enfocadas en la actividad de TLR2