Aislamiento de células madre a partir de tejidos dentales y su capacidad de diferenciación osteogénica

Abstract

Introducción: La regeneración ósea a es un procedimiento requerido en odontología en técnicas quirúrgicas reconstructivas, implantología y en periodoncia. En los últimos años la Ingeniería Tisular ( IT ) se encuentra centrada en el desarrollo de terapias más eficiente para la regeneración de tejido óseo. La IT es una disciplina que se basa en tres elementos principales; a ) señales bioactivas, ( b ) Andamio ( scaffold ) y

( c) Células madre. Un requerimiento fundamental de la IT es el de disponer de fuentes apropiadas de células madres para el desarrollo de nuevas terapias, así como el de conocer las propiedades de estas células para cada aplicación específica. Las células madre son células no diferenciadas que tienen la capacidad de auto renovarse, diferenciarse a multilinajes de células individuales y regenerar en vivo diferentes tejidos. Últimamente se ha generado el interés de aislar células madre de origen dental, donde se han identificadas MSCs en pulpa dental ( DPSCs) , dientes deciduos exfoliados ( SHED) , folículo dental, papila apical radicular ( SCAP ) y ligamento periodontal ( PDLSCs) . Sin embargo, hasta el momento no se conocen estudios que comparen y demuestren diferencias en la habilidad de estas células de distinto origen, para diferenciarse hacia el linaje óseo; ni tampoco que indiquen qué técnica de aislamiento podría ser más apropiada para este propósito. El objetivo del presente estudio consiste en aislar y comparar la capacidad de diferenciación osteogénica de las DPSCs y PDLSCs, utilizando para ello dos técnicas de aislamiento, explante y digestión enzimática. Materiales y Métodos: Se recolectaron terceros molares impactados de pacientes sanos, previa firma de consentimiento informado y se les extrajo el ligamento periodontal y pulpa dental. Ambos tejidos fueron cultivados y aislados mediante el método de digestión enzimática y explante. Se analizó la viabilidad mediante la técnica exclusión azul de tripán y ensayo MTS. La capacidad de diferenciación osteogénica se evaluó a través de la medición de la actividad de fosfatasa alcalina, depósitos de matriz mineralizada y expresión de genes tempranos. Adicionalmente las células fueron sometidas a un periodo de criopreservación donde posteriormente se evaluó su viabilidad. 1 Resultados Para DPSCs y PDLSCs se obtuvieron valores de viabilidad cercanos al 90%, sin diferencia significativas entre ellas. Al evaluar la viabilidad celular a tiempos determinados, las DPSCs- digestión obtiene los mayores valores en cuanto a la cantidad de células al finalizar el cultivo. Los resultados en relación a la diferenciación osteogénica muestran mayores niveles de actividad de ALP y mayores depósitos de matriz mineralizada para las DPSCs, analizados con rojo alizarín y microscopía SEM. Ambos tejidos son capaces de mantener una viabilidad adecuada luego de un proceso de criopreservación. Conclusiones Células osteoprogenitoras aisladas de pulpa dental, presentan mejores propiedades de diferenciación al linaje óseo, comparado con las células madre obtenidas de ligamento periodontal. Las DPSCS-digestión aparecen como una alternativa promisoria para aplicaciones en ingeniería de tejidos orientada a la regeneración ósea en odontología.