Presencia de factores de virulencia en miembros de la familia Bifidobacteriaceae aisladas desde cavidad oral de niños chilenos de 7 a 11 años

Abstract

INTRODUCCIÓN: La caries dental es una enfermedad crónica compleja y multifactorial, de componente infeccioso y de alta prevalencia en el ser humano. Se desarrolla producto de la interacción en el tiempo de una producción de ácidos a partir del metabolismo bacteriano, los dientes y la saliva. La microbiota que interactúa en este proceso es muy diversa. Estudios recientes han identificado a miembros de la familia Bifidobacteriaceae como microorganismos participantes de este proceso. Estos estudios son, en su mayoría, en adultos, y no existen análisis que relacionen estos microorganismos con niños. Por otra parte, las bacterias cariogénicas deben presentan mecanismos de patogenicidad para producir la enfermedad, entre los que se han descrito la aciduria, acidogénesis y la adhesión, todas codificadas por genes. En el presente estudio se buscará la presencia de estos mecanismos a partir de los genes ldh, gadB y spaA.

OBJETIVO: Determinar la presencia de miembros de la familia Bifidobacteriaceae en saliva y caries de niños Chilenos entre 7 y 11 años de edad y analizar los genes que codifican para los factores de virulencia ldh, gadB y spaA.

METODOLOGÍA: Mediante examen clínico, se seleccionó un grupo de 18 niños, 9 niños sin experiencia de caries y 9 con experiencia de caries. Se tomaron muestras de saliva de ambos grupos y muestras de sitio con caries en dentina a niños con experiencia de caries. Se procedió a realizar cultivos en medio MTPY, selectivo para Bifidobacteriaceae. Se aisló ADN genómico desde aislados clínicos seleccionados al azar, se realizó PCR para amplificar un fragmento del ADN del gen 16S ARNr y fueron enviados para su secuenciación. El análisis de estas secuencias permitió identificar las especies presentes en cada muestra. La presencia de los factores de virulencia se realizó por PCR, utilizando partidores específicos para cada gen en análisis (ldh, gadB y spaA). RESULTADOS: Se detectó Parascardovia denticolens, miembro de la familia Bifidobacteriaceae, en el 5,6% de los niños estudiados (n=18). Mediante PCR se determinó que de los aislados clínicos obtenidos, el 50% dió positivo para el factor de virulencia ldh mientras que para los factores de virulencia gadB y spaA no fue posible obtener un amplificado positivo. No se obtuvieron aislados clínicos para otras especies de Bifidobacteriaceae. La especie Actinomyces odontolyticus fue encontrada abundantemente en muestras de saliva del grupo de niños con experiencia de caries y sin experiencia de caries. Se determinó una asociación estadísticamente significativa de este microorganismo a las muestras de saliva de ambos grupos, al comparar con su presencia en los sitios con caries (p=0,01 y p=0,001). Rothia mucilaginosa se encontró asociada a las muestras de saliva en ausencia de experiencia de caries al comparar con su presencia en sitios con caries (p=0,001).

CONCLUSIONES: En niños Chilenos entre 7 y 11 años sólo fue posible detectar la presencia de P. denticolens desde sitios con caries, única especie de los siete géneros de la familia Bifidobacteriaceae. Los aislados clínicos de P. denticolens codifican el gen Idh en un 50% de los aislados, mientras que no codifican para los genes spaA y gadB, por lo que estos aislados no usarían estos mecanismos descritos para la adhesión y resistencia de ambientes ácidos. Se encontraron otras especies bacterianas asociadas al tipo de muestra, como A. odontolyticus encontrada en saliva tanto de niños libres de caries como con experiencia de caries. De este mismo modo existen especies bacterianas relacionadas a la ausencia de caries, como R. mucilaginosa.