Aislamiento, caracterización y evaluación de la capacidad de diferenciación osteogénica de células madre gingivales de zona retromolar

Abstract

Resumen Introducción La reconstrucción ósea de piso de seno maxilar es uno de los procedimientos odontológicos con mayor demanda de tratamientos eficientes para la regeneración de tejido óseo. En este contexto el potencial osteogénico de las células madre (CMs) podría contribuir al desarrollo de mejores terapias de regeneración ósea. Aunque es posible obtener células madre de diferentes tejidos orales, no todas estas fuentes de células son las más apropiadas para sostener procedimientos rutinarios de reconstrucción ósea en implantología oral. La obtención de CMs gingivales de la zona retromolar (ZRM), región ubicada distal al último molar y anteriormente a la rama mandibular, podría constituirse en una fuente compatible de CMs con los procedimientos de reconstrucción ósea maxilofacial. En el presente trabajo se estudió el aislamiento, caracterización, análisis de las propiedades de diferenciación osteogénica y criopreservación de CMs obtenidas desde la ZRM. Las propiedades de estas células fueron comparadas con las de CMs obtenidas de pulpa dental. Hipótesis Es posible aislar células madre gingivales de la ZRM con capacidad de diferenciación osteogénica in vitro. Objetivo Aislar y caracterizar células madre gingivales de la ZRM y evaluar su capacidad de diferenciación osteogénica. 2 Metodología Se realizó el aislamiento y cultivo de células madre mesenquimales (MSCs) a partir de biopsias de encía de la ZRM de pacientes sanos. Para propósitos de comparación, también se aislaron células madre de tejido de pulpa dental. Para el proceso de aislamiento de células madre se llevó a cabo un procedimiento basado en la técnica de digestión enzimática. La presencia de MSCs fue evaluada mediante citometría de flujo. Se utilizaron los anticuerpos monoclonales anti-CD73, anti-CD90, anti-CD105 conjugados respectivamente con isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE) y aloficocianina (APC). Se utilizó la técnica de reducción de MTS ((3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-5-[3-carboximetoxifenil]-2-[4- sulfofenil]-2H-tetrazolio) para medir la viabilidad celular. La capacidad de diferenciación osteogénica de las CMs aisladas de los tejidos dentales se evaluó mediante la actividad de la enzima fosfatasa alcalina (ALP), tinción de rojo de alizarina y el marcador de diferenciación osteogénica Runx2. Se evaluó la capacidad de diferenciación a tejidos osteogénico, adipogénico y condrogénico empleando las tinciones rojo de alizarina, Oil red O y Alcian blue, respectivamente. Resultados Luego del procesamiento de las muestras obtenidas, fue posible obtener MSCs procedentes del tejido gingival de la ZRM (GMSCs) y de la pulpa dental (DPSCs), lo cual fue comprobado mediante marcadores de superficie a través de citometría de flujo y de la diferenciación de estas a tejidos osteogénico, condrogénico y adipogénico, de acuerdo a criterios de la Sociedad Internacional de Terapia Celular (ISCT). Al evaluar la capacidad de diferenciación osteogénica de ambas poblaciones de células, estas resultaron ser equivalentes, respecto a su actividad de ALP y a la formación de depósitos minerales. Por su parte, existió una menor expresión del gen de diferenciación osteoblástica Runx2 en GMSCs en relación a DPSCs. El ensayo de criopreservación realizado demostró que las células de la ZRM presentan una pérdida de viabilidad comparable con la reportada para células obtenidas de tejidos más tradicionales. 3 Conclusiones Es posible aislar células madres mesenquimales a partir de tejido gingival procedente de la ZRM. Estas células poseen un potencial de diferenciación osteogénico equivalente al de las células madre pulpares, y son capaces de resistir el proceso de criopreservación de manera comparable a la de células obtenidas de tejidos tradicionales. Las GMSCs provenientes de la ZRM se presentan como una alternativa terapéutica que a futuro podrían ser de utilidad clínica para mejorar los tratamientos de reconstrucción ósea en el territorio bucomaxilofacial.