Análisis de la presencia de bacterias en los tejidos periodontales durante periodontitis experimental

Abstract

Introducción: La periodontitis es una enfermedad inflamatoria crónica, inducida por un microbiota disbiótica local la cual induce a un desbalance en la respuesta inmune del hospedero resultando en destrucción del tejido de soporte dentario. La interacción entre el tejido epitelial y bacterias periodontales es importante para entender la patogénesis de la periodontitis. Actualmente, existen estudios sobre la presencia de bacterias en el interior del tejido gingival de pacientes con periodontitis. Sin embargo, no hay evidencia de la presencia de bacterias en el tejido periodontal a través del tiempo durante el desarrollo de la patología. Objetivo: Evaluar la presencia de bacterias en los tejidos periodontales de manera secuencial durante periodontitis experimental. Metodología: Se realizó el modelo de periodontitis inducido por ligadura (PIL) utilizando ratones C57BL/6. Se recolectaron muestras de mucosa, molares y tejido ósea para análisis histológico, tejido óseo y molares para pérdida ósea y ligaduras para extracción del DNA en los diferentes tiempos experimentales (2 horas, día 1, 3, 5 y 7 post ligadura). Se utilizó tinción Brown-Brenn para visualizar la presencia de bacterias al interior de los tejidos periodontales y en ligaduras. Utilizando un microscopio se fotografió el campo de estudio. El área que presentaba presencia de bacterias en las ligaduras se determinó utilizando el software Fiji. En trabajos previos utilizando este mismo modelo PIL, se realizó un ensayo qPCR para cuantificar la carga bacteriana total y la pérdida ósea se registró de forma morfométrica en 6 áreas predeterminadas. Como análisis estadístico, se utilizó test Shapiro-Wilk, Kruskall-Wallis y correlación de Spearman con los resultados previos de pérdida ósea y carga bacteriana total. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas si el valor de p <0,05. Resultados: No se observa presencia de bacterias en los tejidos periodontales en los tiempos estudiados (2 horas, día 1, 3, 5 y 7) durante periodontitis experimental. Sin embargo, se visualizan bacterias organizadas en biopelículas en la ligadura, 2 cuya área fue mayor al día 5, correlacionándose positivamente con carga bacteriana total y pérdida ósea durante periodontitis inducida por ligadura. Discusión: En nuestro estudio, no se observa presencia de bacterias en los tejidos periodontales en el transcurso del modelo de periodontitis inducida por ligadura, indicando que la penetración de las bacterias al interior de los tejidos no es un evento indispensable para que se genere la resorción ósea alveolar. La ausencia de bacterias en los tejidos periodontales puede deberse a que trabajamos con un modelo animal experimental de periodontitis y no con muestras de tejidos humanos. Podemos afirmar que, la tinción es efectiva para la detección de bacterias, ya que se observan a nivel de ligadura. Sin embargo, existen métodos alternativos. Uno de ellos, sería utilizar técnicas complementarias como hibridación fluorescente in situ basada en gen 16SrDNA. Es importante destacar que nuestro trabajo es el primer acercamiento hacia la comprensión de la potencial presencia de bacterias en los tejidos periodontales al iniciarse la pérdida ósea alveolar. Además, aportamos con información más precisa de correlación positiva entre presencia de bacterias en la ligadura con pérdida ósea y carga bacteriana total observada, las cuales condicen con resultados previos, demostrando que a medida que transcurre la periodontitis, ambas variables presentan un comportamiento creciente. Conclusiones: Durante periodontitis inducida por ligadura no se observa presencia de bacterias en el interior del tejido periodontal en los diferentes tiempos experimentales. En la ligadura se observan bacterias desde el día 5, que aumentan al día 7, correlacionándose positivamente con pérdida ósea y carga bacteriana total.