Rol de il-35 en la capacidad inhibitoria de los linfocitos t reguladores en los linfocitos t naïve mediante la señalización gp130 y il-12rβ2

Abstract

Introducción: Los linfocitos T CD4+ naïve pueden diferenciarse en distintos fenotipos tales como los linfocitos T reguladores (Tregs) que expresan IL-35, los cuales promueven la supresión de la inflamación y la resorción ósea patológica. En este contexto, IL-35 se ha propuesto como estrategia para el control de procesos inflamatorios y osteolíticos. En un modelo animal de periodontitis experimental, IL-35 induce un incremento en la función de los Tregs, lo que promueve el control de la inflamación y la resorción ósea alveolar. Por lo tanto, el objetivo de este estudio es explicar, al menos en parte, como IL-35 ejerce su acción sobre los Tregs y afecta la activación de los linfocitos T naïve mediante la activación de la vía de señalización gp130 y/o IL-12rβ2. Metodología: De ratones C57BL/6 wild-type, se purificaron linfocitos T CD4+ naïve esplénicos totales y se diferenciaron in vitro a linfocitos Tregs. Luego, se estimuló con 20 o 50 ng/ml de IL-35, en presencia o ausencia de los anticuerpos neutralizantes anti-gp130 y/o anti-IL-12rβ2. Después de 72 hrs, se cuantificó los niveles de expresión de IL-10, TGF-β1, p35 y Ebi3 mediante RT-qPCR y los niveles de secreción de IL-10 mediante ELISA. Seguido, se cocultivaron los linfocitos T naïve y los Tregs, previamente estimulados con 20 ng/mL de IL-35 e incubados con los anticuerpos neutralizantes anti-gp130 y/o anti-IL-12rβ2, para evaluar la activación mediante la detección de los marcadores CD62L, CD69 y CD44 por citometría de flujo. Resultados: Los linfocitos T naïve CD4+CD45+CD62L+CD44- purificados se diferenciaron a linfocitos Tregs CD4+Foxp3+CD25+ . En los Tregs estimulados con 20 o 50 ng/ml de IL-35 se observó un aumento en la expresión de IL-10 y Ebi3 en comparación a las condiciones con los anticuerpos neutralizantes de gp130 y/o IL-12rβ2. Finalmente, IL-35 incrementó la capacidad supresora de los linfocitos Tregs inhibiendo la activación de los linfocitos T naïve mediante la activación de los receptores gp130 y/o IL-12rβ2, evidenciado por un menor incremento en la expresión de CD69 y CD44. Conclusiones: En el presente estudio se estableció que IL-35 incrementa la función supresora de los linfocitos Tregs mediante la activación de la vía de señalización gp130 y/o IL-12rβ2, lo que promueve la sobreexpresión de IL-10 y Ebi3 y la supresión de la activación de los linfocitos T naïve. El incremento de la función supresora y la sobreexpresión de Ebi3 inducida por IL-35 permite inferir la diferenciación de los linfocitos Tregs hacia un perfil iTr35.