Generación de una comunidad bacteriana asociada a periodontitis para estudios in vitro

Abstract

Introducción: En las comunidades asociadas a periodontitis, predominan especies inflamofílicas y proteolíticas, relacionadas con la etiología de la enfermedad. El desarrollo de modelos de estudio basados en comunidades para el estudio de enfermedades polimicrobianas como la periodontitis, son claves para obtener resultados que consideren las interacciones interespecies. En la literatura se reportan diferentes modelos de biopelículas y comunidades planctónicas en quimiostatos que han dado respuesta a distintas preguntas de investigación. No obstante, existe una necesidad de desarrollar modelos de fácil implementación y que aseguren una buena representatividad de las comunidades subgingivales. El objetivo de este trabajo es obtener una comunidad microbiana in vitro con especies bacterianas características de comunidades subgingivales de pacientes con periodontitis. Metodología: Se generaron inóculos a partir de cultivos puros estandarizados de las siguientes especies: Actinomyces oris (Ao), Streptococcus gordonii (Sg), Porphyromonas endodontalis (Pe), Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella melaninogenica (Pm), Streptococcus constellatus (Sc), Tannerella forsythia (Tf), Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum (Fn) y Veillonella parvula (Vp). Para generar las comunidades, se realizaron 3 protocolos diferentes en los cuales variaba la cantidad de inóculo, días de extracción de muestras y suplementación de medio fresco. Los cultivos estandarizados conservados a -80°C, se inocularon en un medio basado en mucina y suero para realizar la comunidad. Se monitoreó el crecimiento por 14 días, colectando muestras para recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) en medios selectivos, y para cuantificación de bacterias totales y especies individuales por PCR cuantitativo (qPCR). Resultados: Se obtuvieron inóculos de cultivos puros de todas las especies incluidas en esta comunidad. Se realizaron 3 protocolos de comunidad, en el protocolo 1 y 2 no existe crecimiento de todas las especies incluidas en la comunidad. En el protocolo 3 se observa que todas las especies presentaron crecimiento, la fase estacionaria se alcanzó el día 7. Los valores de UFC/mL variaron entre 106 a 1012 . 2 Conclusiones Se generó una comunidad polimicrobiana asociada a periodontitis en estado estacionaria. Para lograr este objetivo en un cultivo estático es necesario suplementar con medio fresco para permitir el desarrollo de todas las especies dentro de la comunidad.