Identificación de los fenotipos de neutrófilos n1 y n2 en lesiones periodontales

Abstract

Introducción: La periodontitis es una enfermedad inflamatoria crónica no transmisible inducida por una microbiota subgingival disbiótica que compromete los tejidos de soporte. Una de las células inmunitarias que constituyen la principal línea de defensa del sistema inmune son los neutrófilos, los cuales poseen distintas funciones. Se han descrito dos fenotipos, N1 y N2, sin embargo, en el desarrollo de la periodontitis, no ha sido definido su papel. Metodología: Este estudio observacional, analítico y transversal, incluyó un total de 50 personas, dentro de las cuales 38 son afectadas de periodontitis y 12 son sujetos sanos. Se realizaron biopsias de tejido gingival en cada paciente y las muestras fueron sumergidas en RNA safer para preservar el RNA total, ó en formalina 10%, con el fin de realizar el análisis histológico. En las muestras se realizó la purificación del RNA total de las moléculas IL-1β, IL6, IL-10, IL-12ª, TNF-α, TGF-β1, CCL3, CCL5, Arg1, CD206, y Ym1, donde se analizaron a partir de 50 ng de cDNA mediante qPCR utilizando partidores específicos. A la vez, las muestras se sumergieron en formalina al 10% v/v, los cortes de 10 μm se analizaron mediante inmunohistoquímica utilizando anticuerpos primarios anti-Ly6G y anti- CD206, seguido de un anticuerpo secundario anti-ratón o conejo. Los datos se consideraron estadísticamente significativos cuando el pvalue <0,05. Resultados: En los pacientes afectados por periodontitis, se detectó un incremento de los niveles de expresión de los mediadores pro-inflamatorios CCL3, CCL5, IL-6, IL-12A y TNF-α asociados al fenotipo N1. Por otro lado, los mediadores inmunomoduladores Arg1, CD206, IL-10, TGF-β1, Ym1 están asociados al fenotipo N2. Se evaluó la presencia de neutrófilos N1 (Ly6G+ CD206- ) o N2 (Ly6G- CD206+ ) mediante inmunofluorescencia. En los pacientes afectados por periodontitis se detectó la presencia de neutrófilos N1 y la ausencia de N2 y en las biopsias de personas sanas no hubo detección de estos fenotipos. Conclusión: Las personas afectadas por periodontitis presentan mayores niveles de marcadores asociados a los fenotipos N1, lo que sugiere una mayor frecuencia de detección en comparación con los sujetos sanos.