Obtención de una proteína recombinante PsaA de Streptococcus pneumoniae, homóloga a una de Streptococcus equi

Abstract

Los streptococos patógenos para los equinos incluyen S. equi subsp. equi (S. equi), S. equi subsp. zooepidemicus, S. dysgalactiae subsp. equisimilis y S. pneumoniae cápsula Tipo III. S. equi causa gurma, una linfoadenitis purulenta altamente contagiosa que afecta a los miembros de la familia Equidae. Rápidos progresos se han realizado para la identificación de factores de virulencia y proteínas de S. equi. La mayoría de éstas son expresadas en la superficie bacteriana o son secretadas. Se ha demostrado la presencia de una proteína homóloga a la pneumococcal surface adhesin A (PsaA) de S. pneumoniae, en S. zooepidemicus y S. equi. La PsaA de S. pneumoniae, como otras proteínas, es inmunogénica y protege animales de laboratorio ante un desafío con neumococos. El objetivo de esta memoria fue obtener desde un aislado clínico de S. pneumoniae, una PsaA recombinante purificada desde E. coli BL21DE3. La metodología consistió en amplificar el gen PsaA por PCR y ligarlo al plasmidio de clonamiento (pETBlue-1), luego con la mezcla de ligación PsaA/pSTBlue-1 se transformó la cepa E. coli DH5; de las colonias transformadas, se purificó el plasmidio (PsaA/pSTBlue-1) por lisis alcalina, el cual fue sometido a digestión doble y, el fragmento liberado, fue ligado finalmente a un vector de expresión (pET-15b). Con la mezcla de ligación PsaA/pET-15b, se transformó la cepa E. coli BL21DE3, que expresó una proteína fusionada a una cola de histidina; la proteína fusionada, a su vez, se purificó en una columna con afinidad por histidina (Ni-Nta). La presencia de rPsaA fue analizada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y por Western blot, observándose la presencia de una proteína de 37 kDa., con la que reaccionó específicamente el anticuerpo policlonal de conejo anti His-tag. La secuencia nucleotídica del fragmento fue comparada en la base de datos BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov), encontrándose un 98% de identidad con la cepa S. pneumoniae R6. Además se identificaron cuatro regiones, con identidades superiores al 80%, similares a las del gen parcial mba de la proteína ligadora de metal/adhesina de S. equi, homóloga a PsaA de S. pneumoniae. El producto obtenido permitirá realizar estudios de formulación y evaluación, en modelo animal, de un prototipo de vacuna contra el gurma, basado en la proteína PsaA de S. pneumoniae.