Rol de la autofagia inducida por simvastatina sobre la viabilidad de células de carcinoma mamario canino CF41. Mg

Abstract

Introducción. El cáncer mamario es el tipo de tumor más prevalente en la hembra canina. Información reciente demuestra que simvastatina exhibe un efecto antitumoral in vitro e induce autofagia sobre diversas líneas celulares neoplásicas. Sin embargo, no hay evidencia de que ocurra en células de carcinoma mamario canino. La autofagia es un proceso catabólico que permite a las células sobrevivir bajo condiciones de estrés metabólico, cumpliendo un rol dual en cáncer asociado a supresión y promoción tumoral dependiendo del contexto celular. En ese contexto, la autofagia jugaría un rol en la sobrevida y muerte de células tumorales en respuesta a agentes antitumorales. El objetivo de este estudio fue analizar los efectos de simvastatina sobre la autofagia y la viabilidad de células de carcinoma mamario canino CF41.Mg.

Materiales y métodos. Células CF41. Mg fueron cultivadas y tratadas con simvastatina (1 y 5 M) por 24 horas y analizadas mediante citometría de flujo utilizando naranja de acridina. Se analizó la expresión de LC3 y beclina-1 en células tratadas con simvastatina y 3-metiladenina (inhibidor de autofagia) mediante inmunocitoquímica. Adicionalmente, se realizó un ensayo de viabilidad celular mediante el método de exclusión de azul tripan con células tratadas con simvastatina en presencia de Q-VD-OPh (inhibidor de apoptosis) y 3-metiladenina.

Resultados Tanto la actividad autofágica como la expresión de LC3 y beclina-1 fueron inducidas por simvastatina (p<0.05). Estos efectos fueron revertidos por 3-metiladenina. Simvastatina inhibió la viabilidad celular en forma significativa, aún en presencia de 3-metiladenina (p<0.05). Q-VD-OPh bloqueó el efecto antiproliferativo desencadenado por simvastatina.

Conclusiones El efecto antiproliferativo de simvastatina sobre células de carcinoma mamario canino CF41.Mg no es dependiente de la autofagia inducida por la misma droga. La citotoxicidad de simvastatina se explica casi completamente por la activación de caspasas

Introduction Mammary cancer is the most prevalent type of tumor in the female dogs. Recent data shows that simvastatin exhibit an antitumor effect in vitro and it is able to induce autophagy in some neoplastic cell lines. However, there is still no evidence in canine mammary cancer cells. Autophagy is a mayor catabolic process that allows the cells to survive under metabolic stress, performing a dual role in cancer associated to tumor suppression/progression depending on cellular context. Under this context, the autophagy may play a role in the survival and death of tumoral cell in response to anti-tumoral agents. The object of this study was to analyze the effects of simvastatin over the autophagy and viability of canine mammary carcinoma cells CF41.Mg. Materials and methods CF41.Mg cells were treated with simvastatin (1 y 5 M) for 24 hours and analyzed by flow cytometry using acridine orange dye. The expression of LC3 and beclin-1 in cells treated with simvastatin/3-methyladenine (autophagy inhibitor) by immunocytochemistry was analyzed. Cell proliferation assays with trypan blue dye in presence of simvastatin, Q-VD-OPh hydrate (pancaspase inhibitor) and 3-methyladenine were performed. Results Both autophagy activity and LC3/beclin-1 expression were induced by simvastatin (p<0.05). These effects were reversed by 3-methyladenine. This statin inhibited the cell viability, even in the presence of 3-methyladenine (p<0.05). Q-VD-OPh hydrate blocked the anti-proliferative effect of simvastatin. Conclusions The anti-proliferative effect of simvastatin over canine mammary carcinoma cells CF41.Mg it’s non-depending of the autophagy induced by the drug. The cytotoxicity of simvastatin it’s explained almost completely by the caspases activation