Desarrollo y evaluación de un vehículo basado en iscoms que contiene la proteína PorA de Neisseria meningitidis

Abstract

Los ISCOMs o complejos de inmunoestimulación, son vehículos constituidos por fosfolípidos, colesterol y saponinas con capacidad adyuvante, y que pueden transportar proteínas con un fin inmunológico. Neisseria meningitidis, es una bacteria patógena exclusiva de humanos y es la causante de meningitis, una enfermedad infectocontagiosa. Para el serogrupo B de N. meningitidis no existe actualmente, una vacuna universal que prevenga la enfermedad. La proteína PorA, es una proteína de membrana externa de N. meningitidis y un buen candidato como antígeno, ya que presenta propiedades inmunogénicas para el desarrollo de una vacuna. Como hipótesis se planteó que la inserción de la proteína PorA recombinante de N. meningitidis serogrupo B en el ISCOM, forma un complejo, el cual administrado a ratones por vía oral, genera una respuesta protectora evaluada mediante anticuerpos bactericidas. Para realizar este trabajo, fue necesario expresar y purificar la proteína PorA recombinante desde E. coli. Luego se preparó el complejo ISCOM-PorA, basándose para ello en trabajos anteriores. La relación en peso de las materias primas de la formulación evaluada fue 1:1:5:0,87, correspondiente a colesterol, fosfatidilcolina, saponinas y PorA. La evaluación de los ISCOMs-PorA fue llevada a cabo a través de la visualización del complejo por un microscopio electrónico de transmisión, cuantificación de proteínas mediante el método colorimétrico de Bradford y un análisis de los sueros por medio de la determinación de anticuerpos bactericidas. El resultado de la microscopía mostró ISCOMs-PorA de un tamaño entre los 30 y 50nm aproximadamente. Al analizar los sueros, hubo actividad bactericida en los grupos ISCOM-PorA (25g), ISCOM+PorA (4g) y PorA (10g). En conclusión los ISCOMs son un buen vehículo para el transporte de proteínas por vía oral y que en conjunto con PorA resistieron el medio ácido estomacal, ingresaron al tejido mucosal intestinal y fueron capaces de generar anticuerpos bactericida contra N. meningitidis serogrupo B. Estos resultados preliminares sugieren que la utilización de ISCOM-PorA y ISCOM+PorA son una buena alternativa para el desarrollo de una vacuna para N. meningitidis serogrupo B.

The ISCOMs or immunostimulating complexes, are vehicles constituted by phospholipids, cholesterol and saponins with adjuvant capacity, and that can transport proteins with an immunological aim. Neisseria meningitidis, is exclusive a pathogenic bacterium of humans and is the meningitis cause, a contagious disease. For serogroup B of N. meningitidis does not exist at the moment, a universal vaccine that prevents the disease. The PorA protein, is a outer membrane protein of N. meningitidis and a good candidate like antigen, since it presents immunogenic properties for the development of a vaccine. The hypothesis of this research was: the insertion of the recombinant PorA protein of N. meningitidis serogroup B in the ISCOM, it forms a complex, which administered to mice by oral route, generates an protective answer by means of bactericidal antibodies. In order to make this work, it was necessary to express and to purify the recombinant PorA protein from E. coli. The ISCOM-PorA complex was prepared considering a previous work. The relation in weight of the raw materials of the evaluated formulation was 1:1:5:0,87, corresponding to cholesterol, phosphatydilcoline, saponins and PorA. The evaluation of the ISCOMs-PorA was carried out through the visualization of the complex by an electron microscope of transmission, protein quantification by means of the colorimetric method of Bradford and an analysis of serums by means of the determination of bactericidal antibodies. The result of microscopy approximately showed ISCOMs-PorA of a size between the 30 and 50nm. When analyzing the serums, there were bactericidal activities in the groups ISCOM-PorA (25g), ISCOM+PorA (4g) y PorA (10g). In conclusion the ISCOM is good vehicle for the protein transport by oral route and that altogether with PorA resisted average stomach acid, entered the intestinal mucosal weave and they were able to generate bactericidal antibodies against N. meningitidis serogroup B. These preliminary results suggest it use of ISCOM-PorA and ISCOM+PorA are a good alternative for the development of a vaccine for N. meningitidis serogroup B.