Participación de lipoproteína de baja densidad oxidada (oxLDL) en la inducción de autofagia y sobrevida de miofibroblastos cardiacos

Abstract

Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la principal causa de muerte en el mundo. Los elevados niveles de colesterol y lipoproteína de baja densidad (LDL), que se han relacionado a un aumento de la cantidad de LDL oxidado (oxLDL) destacan entre los factores de riesgo. OxLDL se ha relacionado con el desarrollo de fibrosis cardíaca posterior al daño miocárdico y a la activación o inhibición del proceso autofágico en diferentes modelos celulares. Los miofibroblastos cardíacos (MFC) son células diferenciadas de fibroblastos cardíacos. Son los principales productores de matriz extracelular (MEC) luego del daño tisular, formando un tejido de cicatriz. Una vez terminada su función, los MFC mueren por apoptosis. Sin embargo, se ha identificado la persistencia de MFC en el corazón después del daño, condición que favorece el desarrollo de fibrosis. No hay evidencias que relacionen oxLDL, autofagia y sobrevida celular. En esta memoria se propuso la siguiente hipótesis: “oxLDL induce autofagia y aumenta la sobrevida en miofibroblastos cardiacos”. Los objetivos a desarrollar fueron: a) Evaluar el efecto de oxLDL en autofagia de MFC y b) Determinar el efecto de autofagia y oxLDL en sobrevida de MFC. Se trabajó con MFC estimulados con oxLDL a diferentes concentraciones y tiempos, con el fin de evaluar el efecto en el flujo autofágico. Para ello, se cuantificaron los niveles de LC3-I y LC3-II mediante Western blot. Se utilizó H2O2 como estímulo de muerte para estudiar los efectos de oxLDL y autofagia en la viabilidad celular por conteo con azul de Tripán. Los resultados de este trabajo indicaron que: a) oxLDL por sí solo no indujo activación de la autofagia, sin embargo disminuye la acumulación de LC3-II inducida por cloroquina. b) Autofagia inducida por rapamicina disminuye la viabilidad celular ante estímulo de muerte de H2O2. c) oxLDL no afecta la viabilidad celular ante estímulo de muerte H2O2, no obstante disminuye la muerte celular inducida por rapamicina y H202

Cardiovascular diseases are the leading cause of death worldwide. A major risk factor in these diseases is high levels of cholesterol and low-density lipoprotein (LDL), and this has been correlated with high levels of oxidized low-density lipoprotein (oxLDL). OxLDL is linked to fibrosis development after myocardial injury and this has been correlated with activation or inhibition of autophagic process in various cellular models. Cardiac myofibroblasts (CMF) are a differentiated phenotype from cardiac fibroblasts (CF). They are the main extracellular matrix producers after tisular injury, MFC make a scar and then die via apoptosis. Nevertheless, CMF in cardiac tissue have been identified after their work, this condition promotes fibrosis development and cardiac failure. There is no evidence of relationship between oxLDL, autophagy and cellular survival. The following hypothesis was proposed to this work: “oxLDL induces autophagy activation and enhances cardiac myofibroblast survival”. Specifics objectives to answer the hypothesis were: a) To evaluate the effect of oxLDL on autophagy of MFC, and b) To determine the effects of oxLDL and autophagy on MFC survival. To fulfill the proposed objectives MFC were stimulated with oxLDL and its effects were observed on autophagic flux. LC3-I and LC3-II levels were quantified by Western blot. H2O2 was used as a death stimulus to observe oxLDL and rapamycin-induced autophagy on cellular survival the viable cells where counted by tripan blue method. The results of this works show that: a) oxLDL has no effect on LC3-II levels under normal conditions, but dimish LC3-II chloroquine-induced LC3-II accumulation. b) Rapamycin-induced autophagy dimishes cell survival on death stimulus H2O2. c) oxLDL has no effect on cell survival, but reverts loss of cell viability on MFC treated with H2O2 and rapamycin