Fragmentos de KCTD5 como inhibidores de la proliferación y migración celular en modelo de melanoma

Abstract

Las proteínas son macromoléculas esenciales para el funcionamiento celular y condiciones que alteren su vida media, pueden causar diversas enfermedades. Algunos miembros de la familia KCTD (Potassium channel tetramerization domain) interactúan con miembros de la familia de las Cullin E3 ligasas a través de su dominio BTB (Broad-complex, Tramtrack, Brick-a-brack), los cuales desempeñan la función de andamio e identificador de proteínas objetivo en la ubiquitinación tipo RING (really interesting novel gene). KCTD5, un miembro de la familia KCTD, interactúa con la E3 ligasa Cullin3, participando en procesos de ubiquitinación como adaptador de sustratos, entregando especificidad en la ubiquitinación de las proteínas blanco. Para determinar las funciones que podrían tener los distintos dominios de KCTD5-amino-terminal (N-Terminal), BTB y carboxilo-terminal (C-terminal) y su influencia en la migración y proliferación celular en células de melanoma, se optó por la estrategia de subclonamiento de los dominios y fusionarlos a EGFP como proteína reportera. Cada uno de estos fragmentos se expresaron en las líneas celulares HEK293, Cos7 y B16-F10 para verificar su expresión en sistemas heterólogos, su localización subcelular y la influencia de los fragmentos en procesos biológicos como migración y proliferación. Nuestros resultados sugieren que KCTD5 presenta una localización citosólica predominantemente perinuclear. Por otra parte, los fragmentos BTB, N- y C-terminal de KCTD5 presentan una localización citoplasmática. Finalmente, observamos que ni KCTD5 como los fragmentos de KCTD5 influyen significativamente en procesos proliferativos ni migratorios. Futuros estudios serán necesarios para determinar eventuales usos de estos fragmentos en la modulación de distintas funciones celulares dependientes de KCTD5

Proteins are macromolecules essential for cell function and conditions that alter their half-life, can cause various diseases. Some members of the KCTD (Potassium channel tetramerization domain) family interact with members of the Cullin E3 ligase family through their BTB (Broad-complex, Tramtrack, Brick-a-brack) domain, which serve as a scaffold. and identifier of target proteins in ubiquitination type RING (Really Interesting Novel Gene). KCTD5, a member of the KCTD family, interacts with Cullin3 E3 ligase, participating in ubiquitination processes as a substrate adapter, providing specificity in the ubiquitination of target proteins. In order to determine the functions that the different domains of KCTD5-amino-terminal (N-Terminal), BTB and carboxyl-terminal (C-terminal) and their possible effects on cell migration and proliferation in melanoma cells, we subcloned these domains and fusing them to EGFP as a reporter protein. Each of these fragments were expressed in the HEK293, Cos7 and B16-F10 cell lines to verify their expression in heterologous systems, their subcellular location and the influence of the fragments on biological processes such as cell migration and proliferation. Our results suggest that KCTD5 presents a predominantly perinuclear cytosolic localization. On the other hand, the BTB, N- and C-terminal fragments of KCTD5 present a cytoplasmic localization. Finally, we observe that neither KCTD5 as the KCTD5 fragments significantly influence proliferative or migratory processes. Future studies will be necessary to determine eventual uses of these fragments in the modulation of different KCTD5-dependent cellular functions