Selección de una partícula viral portadora de un scFv dirigido contra el dominio α2 de mica, para el bloqueo de la unión de mica con NKG2D

Abstract

En este trabajo se buscó seleccionar una partícula viral portadora de un scFv dirigido contra el dominio α2 de MICA, que bloquee la unión con NKG2D. Para ello se construyeron dos librerías de scFv de fagos a partir de secuencias de regiones variables humanas. Una de las librerías fue diseñada para evitar la replicación de proteínas truncadas, esto debido a la presencia de secuencias en la librería con marcos de lectura incorrectos. Por otra parte, se subclonó y produjo como proteína recombinante en E.coli, el dominio α2 de la proteína MICA. La proteína llegó a ser parcialmente purificada por una columna de Níquel y por FPLC, la cual mostró funcionalidad en la unión con NKG2D. Además, con las librerías formadas, se seleccionaron clones capaces de reconocer la molécula de MICA recombinante y la proteína dominio α2, verificando su funcionalidad hacia las mismas. También, se probó que es posible desplazar la unión de MICA con NKG2D, usando un anticuerpo monoclonal humano, dirigido contra el dominio α1 de MICA. Por último, se observó que los clones de los fagos seleccionados capaces de reconocer el dominio α2 de MICA, bloquean la unión de ésta molécula al receptor NKG2D