Validación de un método multi-locus basado en PCR-HRM para la identificación de especies comerciales de mejillones (Mytilus spp.) : determinación de la practicabilidad, sensibilidad, robustez y transferencia a un segundo laboratorio

Abstract

El aumento en el consumo de productos del mar ha sido acompañado por una mayor complejidad en los controles del flujo de productos a través del mundo, donde se debe asegurar la trazabilidad. Actualmente existen especies que han sufrido sobreexplotación, y además se han detectado problemas de etiquetado en alimentos a nivel mundial. La industria miticultura en Chile tiene gran importancia debido a que nuestro país es el mayor exportador de mejillones en el mundo, siendo la Unión Europea uno de los principales mercados de destino. Los mejillones, conocidos comúnmente en Chile como choritos, son una familia de moluscos de gran interés económico y gastronómico. Los mejillones del género Mytilus spp. (Mytilidae, Bivalvia) más comercializados son: Mytilus chilensis, M. edulis y M. galloprovincialis. El mejillón chileno (Mytilus chilensis), es genéticamente diferente de M. edulis y M. galloprovincialis. En las costas del país se ha descrito la presencia de M. edulis y de M. galloprovincialis, y se han detectado alelos de M. trossulus, indicando la presencia de presuntos híbridos con M. chilensis. M. galloprovincialis es considerada una especie altamente invasora que produce híbridos viables con M. chilensis, constituyendo una posible amenaza para las poblaciones naturales del mejillón nativo del país. M. trossulus no constituye una especie comercial, pero también hibrida con las especies mencionadas, provocando pérdidas a la acuicultura. La globalización y las alertas recurrentes de inocuidad y fraude alimentario han puesto en evidencia la necesidad de asegurar la trazabilidad de los alimentos. En respuesta, la legislación internacional reciente, como en la Unión Europea (UE), ha introducido nuevos requisitos de identificación de especies en el etiquetado de los productos de la pesca y la acuicultura. Consecuentemente, se hace necesario tener disponibles técnicas rápidas y de bajo costo para realizar esta identificación. Las técnicas basadas en ADN tienen la ventaja de trabajar con una molécula termoestable y permiten una autenticación rápida y definitiva de los productos del mar. Se han desarrollado técnicas que utilizan marcadores en una aproximación “monolocus” para la identificación de la especie, sin embargo, estas metodologías han mostrado resultados inconsistentes entre ellas cuando se aplican simultáneamente, por lo que una metodología basada en múltiples loci permite superar este inconveniente. El High Resolution Melting (HRM) es una metodología simple, rápida y de bajo costo para el análisis de un polimorfismo, se basa en el análisis de las curvas de melting o análisis de curvas de disociación en alta resolución. Recientemente, se desarrolló un nuevo método para la identificación de especies dentro del género Mytilus, a partir de un análisis para la identificación de las tres especies comerciales importantes en nuestro país, M. chilensis, M. edulis y M. galloprovincialis, así como sus híbridos, basado en la tecnología HRM. En el presente estudio, se determinó que dicho método multi-locus basado en PCR-HRM para la identificación de especies comerciales de mejillones del género Mytilus, resulta ser práctico de llevar a cabo, sensible y robusto en su objetivo, pudiendo ser transferido a un segundo laboratorio, lo que representa el primer paso para llegar a ofrecer un análisis a nivel comercial, asegurando resultados de alta calidad, cuya información puede ser usada en la toma de decisiones de la industria mitilicultora nacional