Regulación de la presentación cruzada de antígenos tumorales por la via IRE-1alfa/XBP-1 en células dendríticas

Abstract

La vía de respuesta a proteínas mal plegadas (UPR, Unfolded Protein Response) es esencial para la sobrevida celular, ya que su función es aliviar el estrés intracelular producido por la acumulación de proteinas mal plegadas en el retículo endoplásmico. En el área de la inmunología, un mal funcionamiento de esta vía previene la diferenciación de las células dendríticas (DCs, Dendritic Cells), células plasmáticas, y eosinófilos, afecta la funcionalidad de los macrófagos y se ha asociado a patologías relacionadas con inflamación, autoinmunidad y cáncer. Uno de los ejes de esta vía, IRE-1o/XBP-1, es especialmente relevante para el funcionamiento de las DCs. La señalización de IRE-1cr/XBP-1 se encuentra constitutivamente activada en estas células y, además, es capaz de modular la presentación cruzada de antígenos asociados a células muertas. En cáncer esto es especialmente relevante, pues la mayoría de los antígenos son derivados de células muertas y se ha descrito que el microambiente tumoral contiene señales que son capaces de activar el eje lRE.ia/XBP-1 en las DCs. Es por esto que resulta relevante estudiar si este eje es capaz de modular la presentación cruzada de antígenos específicamente derivados de un ambiente tumoral. En este trabajo de tesis se estableció como objetivo principal el determinar el papel del eje IRE-1a/XBP-1 en la presentación cruzada de un antígeno tumoral y si esta vía de señalización es relevante para la presentación cruzada de un antígeno tumoral por otras subpoblaciones de DCs. Para estudiar lo propuesto, se generaron distintos cultivos de DCs in vitro a partir de precursores de medula ósea de ratones C57BL/6 en presencia de la citoquina FLT3-L y/o GM-CSF. Estas DCs murinas fueron estimuladas con lisados de melanoma humano, como fuente de antígeno, en presencia o ausencia de un inhibidor

farmacológico del dominio ribonucleasa de IRE-1a, que impide el splicing de XBP-1, para luego ser co-cultivados con linfocitos T CD8* derivados del ratón transgénico Pmel-1, que son específicos para un antígeno derivado de la proteína gp100, clásico antígeno asociado a melanoma. Nuestros resultados indican que las DCs que tienen inhibido el dominio ribonucleasa de IRE-1a son menos eficientes que los controles para realizar presentación cruzada de la proteína gp100 derivada de los lisados de melanoma. Esto se traduce en una menor expresión de los marcadores de activación CD69 y CD25, una menor proliferación y una menor capacidad citotóxica (menor expresión de IFN-y) de los linfocitos expuestos a DCs deficientes en IRE-1a. Además, este efecto fue observado en los distintos linajes de DCs establecidos in-vitro, lo que sugiere que el eje IRE-10/XBP-1 es un regulador general de la presentación cruzada de antígenos tumorales. En resumen, los estudios derivados de este seminario de título sugieren que el eje IRE-1oXBP-1 puede convertirse en un nuevo blanco terapéutico para el desarrollo de inmunoterapias basadas en DCs