Rol de las plaquetas en la polarización de macrófagos humanos

Abstract

Antecedentes y objetivo: Los macrófagos son células altamente plásticas que al activarse pueden polarizar hacia dos perfiles establecidos, clásico o alterativo. La activaci6n clásica, genera macr6fagos proinflamatorios. Estas células son eficientes en defender al organismo contra infecciones y agentes extraños. La activación alterativa por el contrario, genera macrófagos reparadores, los cuales participan en los procesos fisiológicos de mantención tisular y en ciertas patologías como desordenes vasculares y cáncer. Las plaquetas, por su parte, son fragmentos celulares que participan en procesos de inflamación y de reparación tisular. Su activación libera diversas moléculas que favorecen la diferenciación de monocitos a macrófagos no polarizados. Sin embargo, se desconoce su efecto en la polarización de macrofagos. Conocer los mecanismos de interacci6n entre plaquetas y macrófagos, dos actores fundamentales, por ejemplo, en la progresión del cáncer, nos permitiría modular el nicho tumoral. Es por estas razones que nuestro trabajo se enfoca en el estudio del rol de las plaquetas en la polarización de macrófagos. Metodología: A partir de donantes sanos de Banco de Sangre, se obtuvo Plasma Rico en Plaquetas Q'RP) o Suero Rico en Factores de Crecimiento (SRFC) (derivado de la activaci6n del PRP con cloruro de calcio). Se midió la concentración de plaquetas en el PRP y el contenido de citoquinas presente en el SRFC. Paralelamente, se cultivaron monocitos CD14+ purificados mediante "rosetas" en medio RPMI/ SFB/ M-CSF durante siete días. Luego, las células fueron cosechadas y caracterizadas morfológica y

fenotípicamente por microscopia óptica y citometría de flujo, respectivamente. Por ultimo, los macrófagos generados fueron estimulados durante 24 hrs. con SRFC o plaquetas completas (PRP), y se realiza una caracterización fenotípica mediante citometría de flujo y se midió la producción de citoquinas mediante ELISA. Resultados: Los macrófagos generados a partir de montoncitos humanos, presentaron una morfología típica y expresaron los marcadores clásicos del linaje monocito-macrofago CDllc, CD14 y CD32. La estimulación de estos macrófagos no polarizados con SRFC, que contiene una alta concentración de TGF-P, no genero diferencias significativas en la expresión de los marcadores CD206, CD163 y CD86 o en la producción de citoquinas en comparación al control no estimulado. En contraste, ante la estimulación de macrófagos con PRP (piquetas integras) se encontr6 un aumento en 'la expresi6n del receptor de manosa CD206 y en los niveles de IL-10, en relaci6n al control sin estinulaci6n. Tanto CD206 como IL-10, son marcadores característicos del perfil reparador o alternativamente activado. Conclusi6n: Las plaquetas integras inducen la polarizaci6n de macr6fagos hacia un fenotipo reparador (protumoral). Nuestra proyeccion es establecer si en un microambiente tumoral existe una interacci6n entre plaquetas y macr6fagos que promueva el desarrollo y la propagación del tumor