Desarrollo y validación de un método para el análisis simultáneo de gabapentina, pregabalina y topiramato, en suero o plasma por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC/UV)

Abstract

El presente trabajo describe un método analítico novedoso, sencillo y de bajo costo que permite cuantificar tres fármacos antiepilépticos: Gabapentina (GBP), Pregabalina (PGB) y Topiramato (TPM), mediante el uso de HPLC UV/Vis. La incapacidad de absorber al UV por parte de los fármacos antes mencionados requiere de una derivatización pre-columna de los analitos, utilizando FMOC-Cl como agente derivatizante para formar un complejo que absorba al UV. Se demostró que la linealidad de las curvas de calibración se encuentra en el rango de concentración de 4 a 35 μg/mL (r > 0,99) para GBP, 2 a 12 μg/mL (r > 0,99) para PGB, y de 4,4 a 24 μg/mL (r > 0,99) para TPM. Las imprecisiones del laboratorio, expresadas como CV% son de 1,53% para ZE-01 (26,09 μg/mL) y 2,92% para ZE-03 (14,2 μg/mL) de GBP; 3,05% para ZE-01 (15,19 μg/mL) y 4,07% para ZE-03 (8,66 μg/mL) de PGB; 2,73% para ZE-01 (22,05 μg/mL) y 3,84% para ZE-03 (12,48 μg/mL) de TPM. La incertidumbre expandida es de 4,72 μg/mL para GBP, 7,5 μg/mL para PGB, y 6,90 μg/mL para TPM. Una vez validado el método, se implementó un kit para la determinación de dichos fármacos con sus respectivos procedimientos, posibilitando la determinación de los tres analitos dentro de la misma corrida analítica para el laboratorio patrocinante LQCE. El método informado es apropiado para TDM, así como para estudios farmacocinéticos y de bioequivalencia.

The present work describes a novel, simple and low-cost analytical method that allows the quantification of three Antiepileptic Drugs (AEDS): Gabapentin (GBP), Pregabalin (PGB) and Topiramate (TPM), through the use of HPLC UV/Vis. The inability to absorb in the UV range by the aforementioned drugas requires pre-column derivatization of the analytes, using FMOC-Cl as a derivatizing agent to form a complex that absorbs in the UV range. The linearity of the calibration curves was proved to be in concentration range of 4 to 35 μg/mL (r > 0.99) for GBP, 2 to 12 μg/mL (r > 0.99) for PGB, and 4.4 to 24 μg/mL (r > 0.99) for TPM. Laboratory inaccuracies, expressed as CV%, are 1.53% for ZE-01 (26.09 μg/mL) and 2.92% for ZE-03 (14.2 μg/mL) for GBP; 3.05% for ZE-01 (15.19 μg/mL) and 4.07% for ZE-03 (8.66 μg/mL) for PGB; 2.73% for ZE-01 (22.05 μg/mL) and 3.84% for ZE-03 (12.48 μg/mL) for TPM. The expanded uncertainty is 4.72 μg/mL for GBP, 7.5 μg/mL for PGB, and 6.90 μg/mL for TPM. Once the method was validated, a kit was implemented for the determination of said drugs with their respective procedures, enabling the determination of the three analytes within the same analytical run for the sponsoring laboratory LQCE. The reported method is appropriate for TDM as well as for pharmacokinetic and bioequivalence studies.