Patrón de expresión y distribución de la integrina [alfa]6[beta]4 en células acinares de glándulas salivales de pacientes con síndrome de Sjögren

Abstract

El síndrome de Sjögren es una enfermedad autoinmune que causa alteraciones en la estructura y función de las glándulas exocrinas debido a la destrucción de la lámina basal de acinos y ductos, y a la degradación de las principales proteínas de matriz extracelular. El progresivo reemplazo de componentes exocrinos por tejido adiposo y fibroso, conduce a la sequedad de mucosas, principalmente oral (xerostomía) y ocular (xeroftalmia), que son los principales síntomas de esta enfermedad. En las glándulas de estos pacientes, también se pueden encontrar focos de infiltrado linfocitario, los que se correlacionan con el progreso de la enfermedad. Sin embargo, cambios importantes en las células epiteliales y la matriz extracelular, darían cuenta del desarrollo de esta enfermedad de manera independiente a la presencia de infiltrado de células mononucleares. A nivel molecular, la degradación de la matriz extracelular es inducida por un desequilibrio entre metaloproteinasas de matriz y sus inhibidores tisulares, favoreciendo la actividad proteolítica. La degradación de componentes de la lámina basal desorganiza la estructura y conduce a la pérdida de anclaje celular a la matriz extracelular. La señalización dependiente de anclaje mantiene la polaridad celular principalmente a través de complejos de adhesión llamados hemidesmosomas. El receptor involucrado en formar estas estructuras es la integrina α6β4, cuyo ligando de mayor afinidad es la laminina-5. Recientemente se ha demostrado que la laminina-5 está sobreexpresada (a nivel de proteínas y mRNA) en glándulas salivales labiales de pacientes con síndrome de Sjögren. Además, análisis de microarreglos de cDNA obtenidos de glándulas salivales labiales de pacientes con síndrome de Sjögren, y comparados con los obtenidos de individuos control, han demostrado que varias proteínas citoplasmáticas normalmente asociadas a la integrina α6β4, por ejemplo BP230 y citoqueratina 8/18, están sobreexpresadas. Las integrinas, además de su papel como mediadores de la interacción célulamatriz, participan en la señalización hacia y desde la célula (señalización bidireccional), la que es importante para regular procesos como proliferación, diferenciación y muerte celular. Por lo tanto, la degradación no regulada de lámina basal, no sólo modifica las propiedades de adhesión de la célula, sino también las señales que estos receptores xiii llevan al interior de la célula, conduciendo a importantes cambios que pueden llevar a la muerte celular. De esta manera, se decidió analizar los niveles de expresión y localización subcelular de la integrina α6β4 en células acinares de pacientes con síndrome de Sjögren e individuos control, y así estudiar si estos se relacionan con los cambios que ocurren en estas glándulas. Se propuso la siguiente hipótesis: “En glándulas salivales de pacientes con síndrome de Sjögren la pérdida de adhesión de células acinares a su lámina basal y la sobreexpresión de laminina-5, se acompañan de una sobreexpresión y/o redistribución de la integrina α6β4” Para evaluar esta hipótesis, se determinaron los niveles de mRNA y de proteínas de las subunidades α6 y β4 en glándulas salivales de pacientes con síndrome de Sjögren y se compararon con los resultados obtenidos de individuos controles. Además, mediante inmunohistoquímica, usando anticuerpos específicos para cada subunidad, se analizó la localización de la integrina α6β4 en la membrana plasmática de células acinares y la de laminina en láminas basales de acinos de glándulas salivales. Los resultados obtenidos no mostraron diferencias significativas en los niveles relativos de mRNA entre pacientes y controles, tanto para la integrina α6 (p = 0,49) como para la integrina β4 (p = 0,71). Al analizar los niveles relativos de proteínas, en el caso de α6, no se encontraron diferencias significativas entre el grupo total de pacientes y el grupo control (p = 0,2), sin embargo, al separar el grupo de pacientes en dos subgrupos de acuerdo a su nivel de expresión, se encontró que el que presentaba niveles menores no tenía diferencias significativas respecto al grupo control (p = 0,296), mientras que el otro, que presentaba niveles relativos mucho más altos, sí mostró diferencias significativas (p = 0,014). En cuanto a la proteína β4, ésta se encontró de manera intacta (200 kDa) y proteolizada (172 y 145 kDa) tanto en pacientes como en controles. De ambas formas, los niveles fueron significativamente menores en pacientes respecto a controles (p = 0,02). En cuanto a la localización subcelular de la integrina, en pacientes se encontró una importante redistribución hacia la superficie lateral de la célula, encontrándose xiv incluso a nivel citoplasmático en los casos de mayor desorganización de la lámina basal. Estos y otros resultados confirman de manera parcial la hipótesis, donde el mecanismo de rescate al desanclaje podría llevarse a cabo a través de la redistribución de la integrina α6β4 a nivel subcelular. Existirían otros mecanismos por los cuales se mantendrían activas algunas de las señales dependientes de anclaje, para completar el sistema de rescate a la muerte celular, y que no pasarían necesariamente por una mayor cantidad de integrina α6β4.