Resistencia a ácido e identificación de aislados clínicos de Lactobacillus spp. de la cavidad oral de niños de 7 a 11 años sin experiencia de caries versus con caries dentinarias profundas

Abstract

La caries dental es una de las enfermedades crónicas infecciosas más prevalentes en el mundo. Las lesiones de caries se desarrollan al producirse la pérdida del equilibrio entre los procesos de desmineralización y remineralización del esmalte y dentina, debido a disminuciones en el pH ambiental, que alcanzan el nivel crítico de desmineralización del esmalte (pH 5,5). Esta disminución en el pH se produce debido a la presencia de una biopelícula bacteriana en la superficie dental, compuesta por bacterias acidogénicas (capaces de producir ácidos) y acidúricas (capaces de sobrevivir en un ambiente ácido y seguir produciendo ácido), que producen ácidos orgánicos como producto de la fermentación de carbohidratos de la dieta. Una de las especies dominantes en la biopelícula bacteriana dental corresponde a Lactobacillus, uno de los géneros más grandes y diversos de bacterias productoras de ácido láctico, las que han sido consideradas por décadas como agentes etiológicos de la caries dental, siendo aisladas desde sitios activos de caries y asociadas sistemáticamente con la presencia y progresión de esta patología. Mientras que la habilidad para producir ácido vía fermentación de azúcares es considerada como una característica innata de las distintas especies de Lactobacillus, su habilidad para sobrevivir y funcionar en ambientes ácidos (aciduria) es una característica fundamental para su supervivencia. En lesiones activas de caries podemos encontrar valores de pH cercanos a 4,5 y si consideramos el microambiente que rodea a cada célula bacteriana en la placa dental podemos alcanzar valores menores a 3. Además se ha descrito que las especies de Lactobacillus aisladas desde sujetos con alta experiencia de caries son más acidogénicas, por lo que es posible suponer que estas especies también estarían expuestas a ambientes más ácidos, por lo que poseerían una mayor capacidad para resistir estas condiciones ambientales.

Por todos estos antecedentes, en este estudio se buscó determinar si las especies de Lactobacillus aisladas desde sitios de caries dentinaria profunda poseían una mayor resistencia a ácido y diferían de las especies aisladas desde saliva de individuos con o sin caries. Además, se propuso que las especies de Lactobacillus encontradas en cada sitio serian diferentes. Para esto se analizaron muestras provenientes de saliva y lesiones de caries de 17 niños de 7-11 años, 8 sin experiencia de caries y 9 con al menos una caries en dentina, a fin de determinar las diferentes especies de Lactobacillus presentes en cada condición y la resistencia a ácido de cada una de éstas. Para esto, cada muestra se sembró y cultivó en placas de medio MRS a pH 6,2 y pH 4,2, y luego se identificaron las especies presentes, mediante el uso de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciación. Los resultados obtenidos indican que las muestras obtenidas desde sitios de caries poseen Lactobacillus spp. más resistentes a ácido que las muestras de saliva de los mismos niños con caries (p=0,084). Si bien las especies de Lactobacillus aisladas desde diferentes sitios no difieren entre sí, pudimos observar que L. fermentum y L. rhamnosus, se encontrarían significativamente asociadas a saliva de niños sin caries (p=0,0007 y p=0,002) y especies como L. salivarius y L. johnsonii / L. gasseri se encontrarían asociadas a saliva de niños con caries (p<0,0001 y p=0,0391). Del mismo modo, L. casei / L. paracasei se encontraría significativamente asociada a las muestras de caries (p=0,0005). Por lo tanto, se concluye que las especies de Lactobacillus aisladas desde sitios de caries de niños de 7-11 años de edad, poseen una mayor resistencia a ácido que las obtenidas desde muestras de saliva de los mismos niños con caries, además, estos niños presentan mayor diversidad de especies de Lactobacillus en boca, que los niños sin lesiones de caries para el mismo rango de edad. Y que existen especies de Lactobacillus (L. fermentum y L. casei / L. paracasei) que poseerían mayor resistencia ácido y que se encontrarían principalmente habitando sitios de caries.

También, se concluye que existen especies de Lactobacillus relacionadas a la ausencia de caries (L. fermentum y L. rhamnosus) y otras relacionadas a la presencia de caries, específicamente a saliva (L. salivarius y L. johnsonii / L. gasseri) o a sitios de caries (L. casei / L. paracasei).