Efecto del H2O2 sobre la actividad de las metaloproteinasas de matriz extracelular con actividad osteolítica y la vía de señalización NFkB en fibroblastos del ligamento perioodontal humano

Abstract

las especies reactivas de oxígeno (ERO), entre ellas H202, son liberadas durante la inflamación crónica inducen la destrucción tisular por medio de la sobreexpresión de citoquinas proinflamatorias y la activación de metaloproteinasas de matriz (MMP), en ocasiones involucrando la activación de la vía de señalización NFκB. Si bien, los fibroblastos del ligamento periodontal (FLP) regulan la homeostasis del periodonto, no se conoce el efecto de las ERO sobre la síntesis y actividad de las MMPs y las vías de señalización involucradas.

Objetivo: Evaluar la actividad de MMPs -2 y -9 en conjunto con la participación de la vía NFκB en cultivos primarios de FLP humano tratados o no con dosis subletales de H2O2. Metodología: FLP fueron aislados y cultivados a partir de 14 terceros molares sanos de 14 sujetos con indicación de extracción y expuestos a dosis subletales de peróxido. La activación de NFκB se determinó mediante la translocación nuclear de la subunidad p65 en presencia de H2O2 y/o SN50, un péptido inhibidor de la subunidad p50 de la vía NFκB y controles respectivos mediante inmunofluorescencia. Los FLP fueron estimulados con dosis subletales de H2O2 (2,5-10 µM) por 24 h y/o SN50 como control negativo. Los sobrenadantes fueron recolectados y procesados. La actividad de las proformas y formas activas de MMP-2 y MMP-9 fueron determinadas mediante zimografías en gelatina y evaluadas por densitometría. Los resultados fueron expresados como unidades arbitrarias densitométricas (ua) por mg de proteínas totales. Los resultados fueron analizados por medio del test estadístico ANOVA con el software StataV11.1.

Resultados: La viabilidad celular se mantuvo en los grupos estimulados con H2O2 en dosis de 2,5-10 µM por 24 h. El H2O2 Indujo la translocación nuclear de NFκB. El porcentaje de activación (% A) de MMP-9 fue mayor en el grupo H2O2 5 μM que en el grupo 5 μM/ SN50 (p=0,051); mientras que el % A de MMP-2, aumentó significativamente en el grupo H2O2 5 μM comparado con el control. La actividad de MMP-9 fue significativamente mayor en el grupo H2o2 2,5 μM comparado con el de 5 μM/ SN50 y el de 10 μM; mientras que la actividad de MMP-2 aumentó significativamente en el grupo de 5 μM en comparación con el grupo control, 10 μM y el grupo de 5 μM + SN50.

Conclusiones: La actividad gelatinolítica de MMP-2 aumenta con dosis subletales de H2O2 (<10 µM), en parte vía NFκB en FLP humano. La actividad de MMP-9 en FLP humano, está regulada parcialmente por la vía NFκB. El aumento en la actividad de MMP-2 inducido por H2O2, podría estar relacionado con la destrucción de tejido en las enfermedades periodontales.