Análisis mutacional del gen amelogenina (AMELEX) de una familia colombiana afectada por Amelogénesis Imperfecta, usando amplificación de genoma completo

Abstract

Amelogénesis imperfecta (AI) es un término utilizado para describir un grupo de desórdenes hereditarios de manifestación clínica y genética heterogénea, de baja prevalencia, que afectan el desarrollo del esmalte dentario, causando anomalías en su cantidad y calidad. Las AI se clasifican en 14 subtipos distintos basados en el fenotipo clínico, rasgos secundarios específicos (como textura y localización de los defectos del esmalte) y patrón de herencia. Hasta la fecha, se han descrito al menos 13 genes relacionados con casos de AI no sindrómica. El gen amelogenina (AMELX) es el principal gen relacionado con AI con patrones de herencia ligada al cromosoma X y se asocia con fenotipos hipoplásicos/hipomaduros. Actualmente, se han reportado 21 mutaciones en este gen. El propósito de este trabajo fue identificar mutaciones descritas o nuevas variantes de secuencia en el gen amelogenina (AMELX), usando DNA amplificado de un sujeto afectado perteneciente a una familia Colombiana con AI hipoplásica que presenta un probable patrón de herencia ligado al cromosoma X. Para llevar a cabo el estudio, se realizó un análisis clínico, genealógico y radiográfico del probando con los datos obtenidos por las tutoras asociadas. El análisis genético molecular consistió en la secuenciación completa del gen AMELX incluyendo región promotora y regiones codificantes, más secuencias intrónicas circundantes, mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y secuenciación directa de fragmentos de ADN amplificado del probando y de un sujeto control. Posteriormente, las secuencias fueron comparadas con la secuencia de referencia de AMELX (NM_012090.1). Paralelamente, se realizó un análisis bioinformático de las principales variantes exónicas, intrónicas y del promotor del gen AMELX, con el objetivo de conocer el potencial efecto que éstas podrían causar en el gen si se encontraran presentes en la secuencias del paciente.

El análisis de los resultados no evidenció la presencia de ninguna de las 21 mutaciones reportadas o nuevas variantes de secuencia. Sin embargo, no se puede descartar la presencia de una mutación en alguna región no cubierta en este estudio u en otro gen del cromosoma X. Por otra parte, los resultados del análisis bioinformático mostraron que algunas variantes missense e intrónicas poseen un alto potencial de causar un efecto dañino en la proteína y/o en su procesamiento. Sin embargo, estas variantes tampoco fueron encontradas en el rastreo de la secuencia. Los resultados obtenidos en este estudio refuerzan el concepto de una enfermedad con manifestación clínica y genética heterogénea, causada en este caso probablemente por un gen distinto a amelogenina.