Papel del antígeno 0 del lipopolisacárido de Porphyromonas gingivalis en el perfil de diferenciación de macrófagos

Abstract

Introducción: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) es considerado patobionte “clave” en el inicio y progresión de enfermedades periodontales, uno de sus factores de virulencia e inmunógeno es el lipopolisacárido (LPS); mientras que en nuestros aislados clínicos de pacientes con periodontitis se observa que el LPS presenta su estructura completa, en aislados clínicos de pacientes sanos no presenta Antígeno O (AgO). Objetivo: Caracterizar el perfil de polarización de macrófagos THP-1, y determinar niveles de citoquinas pro y antiinflamatorias inducidas por el LPS de las cepas de P. gingivalis silvestre (W50) y un mutante carente de AgO (ΔPG1051). Métodos: Las células THP-1 fueron diferenciadas a macrófagos con PMA y estimuladas por 24 horas con LPS de las cepas W50 (ATCC 53978), ΔPG1051 mutante nulo para gen de la ligasa del AgO (WaaL) y CΔPG1051 cepa complementada para WaaL. Se utilizaron como controles positivos LPS comercial de Escherichia coli y de P. gingivalis 33277, y como control negativo, medio de cultivo. El perfil de polarización se evaluó mediante citometría de flujo con marcadores M1 (CD64 y CD80) y M2 (CD163 y CD206). El nivel de citoquinas secretadas (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e IL-12) se determinó mediante Multiplex en plataforma Luminex. El análisis estadístico se realizó con STATA 12®. Resultados: Se identificó una tendencia hacia una mayor polarización M1 al estimular con P. gingivalis en comparación con el control sin estímulo, particularmente para porcentaje de macrófagos CD64+, que fue mayor en las cepas W50 y ΔPG1051 versus E. coli, mientras que el porcentaje CD80+ y CD206+ fue significativamente mayor en E. coli, respecto cepas W50, ΔPG1051 y controles (p<0,05). En los niveles de citoquinas, se encontraron aumentos de TNFα, IL-1β, IL6, IL-12 e IL-10 al estimular con P. gingivalis versus el control sin estímulo. No se

observaron diferencias significativas respecto de la presencia o ausencia del OAg.

Conclusiones: P. gingivalis presenta un potencial inmunogénico bajo, comparado con E. coli. La diferenciación M1, sobre la base de marcadores de superficie y secreción de citoquinas dependería de otros factores de virulencia de P. gingivalis, diferentes del AgO.