Efecto de las vesículas extracelulares derivadas de linfocitos T reguladores inducidos con ácido retinoico en la respuesta inmune y la resorción ósea durante la periodontitis,rol de CD73

Abstract

La hidrólisis del AMP extracelular gatillada por la ecto-5'-nucleotidasa CD73 genera adenosina (ADO), una potente molécula inmunosupresora que limita la inflamación. Los linfocitos T (LTs) reguladores murinos inducidos en presencia de ácido retinoico (RATregs) y sus vesículas extracelulares secretadas (RATEVs) están enriquecidas en CD73, lo que podría dotarlas de funciones inmuno-moduladoras acelulares. La naturaleza inflamatoria de la periodontitis desencadenada por una respuesta inmune desregulada promueve la resorción ósea. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de las RATEVs sobre la respuesta inmune y la resorción ósea alveolar inducida durante la periodontitis. Paralelamente, exploramos la capacidad inmunosupresora de las RATEVs sobre la función efectora de los LTs in vitro, así como el rol de CD73 en este efecto. Métodos: RATregs y RATEVs se aislaron y caracterizaron. El enriquecimiento de CD73 en las RATEVs se caracterizó por Western Blot, citometría de flujo de generación de imágenes (IFC) y convencional (FC), mientras que su actividad enzimática (AMPasa) se estudió mediante ensayos de producción de ADO y fosfato. El efecto de las RATEVs sobre la respuesta inmune y la pérdida de hueso alveolar asociados a la periodontitis se evaluó en un modelo murino mediante FC y análisis morfométrico/histológico, respectivamente. Por último, la capacidad inmunosupresora de las RATEVs se caracterizó evaluando su efecto sobre la proliferación y activación de LTs, mientras que la relevancia de CD73 cargada en las RATEVs se estudió a través del bloqueo de su actividad AMPasa utilizando un inhibidor específico de CD73. Resultados: Los RATregs y las RATEVs mostraron una alta expresión de CD73 y actividad AMPasa. Durante la periodontitis, las RATEVs redujeron la activación de los LTs CD4+ , la secreción de IL-17A, la expresión de RANKL, y previnieron la resorción ósea alveolar. Además, en presencia de AMP, las RATEVs suprimieron a los LTs CD4+ , efecto que fue parcialmente revertido ante la adición del inhibidor de CD73. Conclusión: Los RATregs secretan VEs enriquecidas en CD73 enzimáticamente activa. Las RATEVs suprimen la respuesta efectora de los LTs CD4+ y previenen la pérdida ósea alveolar inducida por la periodontitis, proceso que depende de la actividad AMPasa de CD73.