Caracterización de la autofagia mediada por chaperonas durante la diferenciación de odontoblastos a partir de células madre de la pulpa dental humana

Abstract

Introducción: La dentinogénesis es el mecanismo donde la papila dental elabora una matriz orgánica para formar dentina a través de células especializadas llamadas odontoblastos. La autofagia mediada por chaperonas (CMA) es un proceso celular catabólico en el que proteínas citoplasmáticas son reconocidas a través de la secuencia aminoacídica KFERQ mediante la proteína chaperona HSC70, que permite la interacción con la proteína LAMP2A en la membrana lisosomal para su translocación y degradación. Se sabe que la macroautofagia está involucrada en la diferenciación de odontoblastos, pero no hay evidencia de otras vías como la CMA. Objetivos: Determinar si la actividad de CMA regula el proceso de diferenciación de células mesenquimáticas aisladas desde pulpa dental humana (hDPSCs) hacia odontoblastos. Metodología: Se obtuvieron hDPSCs a partir de terceros molares de adultos sanos. Para la diferenciación de hDPSCs a odontoblastos se caracterizaron tres diferentes medios de cultivo: i) medio de diferenciación (-MEM suplementado al 5% con suero fetal bovino (FBS), ácido ascórbico (50 g/mL) y β-glicerofosfato (10 mM)), ii) medio de diferenciación suplementado con dexametasona (0,1 M), iii) medio de diferenciación suplementado con dexametasona (0,1 M) y TGF-β (10 ng/mL). Como control se utilizó medio -MEM suplementado con 10% FBS. La mineralización, en diferentes etapas de diferenciación, se evaluó con tinción alizarin red. Paralelamente, se evaluaron los niveles de expresión de DMP1 y DSPP (marcadores de diferenciación odontoblástica) mediante western blot. Por otro lado, para evaluar la participación de CMA durante la diferenciación, se evaluaron los niveles de expresión de la proteína LAMP2A durante el proceso de diferenciación de hDPSCs, tanto en células control como en líneas celulares con actividad aumentada y disminuida de LAMP2A y por consecuencia, CMA. ix Resultados: Los niveles de actividad de CMA aumentan al inicio de la diferenciación para luego disminuir a medida que continúa el proceso. Además, la inhibición de CMA retarda dicho proceso, mientras que su sobre expresión lo acelera. Conclusión: Este trabajo caracteriza por primera vez, el papel de la actividad de CMA en la diferenciación de odontoblastos a partir de hDPSCs. Al estar relacionada con la diferenciación, CMA se proyecta como un nuevo hito en el estudio del desarrollo de la dentinogénesis.