Estudio comparativo de dos técnicas de extracción de ADN genómico de levaduras del género cándida para su análisis por RAPD-PCR

Abstract

Introducción. El estudio de hongos depende cada vez más de técnicas moleculares modernas como Polimerase Chain Reaction (PCR). Muchos cultivos microbianos son sometidos directamente a PCR, sin embargo, en levaduras, las técnicas para extracción de ADN son combinadas con procedimientos laboriosos y extensos para romper la pared celular. Recientemente, se ha descrito la técnica FTA ® (Flinders Technology Associated de Whatman), mediante la cual se colecta, transporta, almacena y purifica ADN en forma simultánea. El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo de dos métodos de purificación de ADN genómico de levaduras del género Cándida, y su aplicabilidad para el análisis por la técnica de Random Amplified Polymorphic ADN mediante PCR (RAPD-PCR). Material y Método. Se comparó un método convencional basado en la ruptura de las paredes de levaduras con perlas de vidrio, combinado con extracción fenólica y el método de purificación con cartas FTA ® . Se purificó ADN genómico de 10 cepas de C. albicans, el cual fue posteriormente sometido a la técnica de RAPD-PCR, usando dos partidores diferentes. Para evaluar los resultados se analizó el conjunto de amplicones, el índice de error de amplificación (IEA), el número total de genotipos y la variabilidad genética se representó mediante un dendograma. Resultados. Para todas las cepas analizadas, con el método convencional y el partidor OPBA13 se obtuvo un único genotipo, un IEA = 0 y con el partidor CaBUO1 2 genotipos y un IEA = 0,13. En cambio, con el método FTA, usando el partidor OPBA13 se obtuvo 7 genotipos distintos, con un IEA = 0,55 y con el partidor CaBUO1 las cepas mostraron 12 genotipos y un IEA = 0,9. Conclusiones. Se observó que existen diferencias en el análisis de la variabilidad genética de levaduras del género Candida, determinada por la técnica de RAPDPCR,

utilizando ADN genómico obtenido por el método convencional y por la técnica que usa las cartas FTA. Se requieren análisis adicionales para optimizar las condiciones de PCR con los filtros FTA.