Haptoglobina, EIF4e y Anexina IV como nuevas señales de peligro (DAMPs) y su rol en la maduración in vitro de células dendríticas de uso terapéutico

Abstract

Las vacunas basadas en células dendríticas (DCs) han surgido como una herramienta prometedora en la inmunoterapia contra el cáncer debido a su capacidad para estimular la respuesta inmune antitumoral. Recientemente, se ha mostrado que DCs estimuladas con un lisado celular derivado de tres líneas tumorales de melanoma alogénicas (TRIMEL) sometidas a heat shock, inducen una potente respuesta inmunológica en pacientes con melanoma. El lisado TRIMEL funciona tanto como una fuente de antígenos asociados a tumor (TAA), así como induciendo la maduración de las DCs mediante patrones moleculares asociados a daño, del inglés damage-associated molecular patterns molecules (DAMPs). Dada las características de este lisado, se identificó el perfil proteómico de TRIMEL con y sin heat shock (HS), dando como resultado 71 proteínas diferencialmente sobreexpresadas por efecto del HS. Luego de aplicar criterios adicionales, se seleccionaron las proteínas Haptoglobina (HP), EIF4e y Anexina IV (ANX4), como candidatas a DAMPs desconocidos que puedan explicar, al menos en parte, la capacidad del lisado TRIMEL en la activación de DCs. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de estas proteínas sobre distintos marcadores de maduración en DCs humanas. Se generaron DCs a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de ocho donantes sanos. HP, EIF4e y ANX4 se utilizaron como estímulo de maduración por si solas o en combinación con TRIMEL sin HS. Mediante citometría de flujo se evaluó la expresión de diversas moléculas de superficie asociadas a DCs maduras: MHC-I, MHC-II, CD80, CD83, CD86 y CCR-7. Los resultados obtenidos en esta tesis mostraron que al estimular DCs con EIF4e y HP se produce un incremento significativo en la expresión de los marcadores de superficie MHC-I, CD80, CD83, CD86 y CCR7, sugiriendo que estas proteínas podrían actuar como DAMPs de manera independiente. Sin embargo, es necesario evaluar otros parámetros de funcionalidad celular como el perfil de citoquinas secretado por las DCs estimuladas, capacidad

migratoria y la interacción con linfocitos T (LT), los cuales podrían demostrar de forma más concluyente la actividad de estas proteínas como DAMPs.