Influencia de la proteína salival Histatina-1 en la migración y adhesión de células endoteliales

Abstract

Introducción: La saliva es un fluido oral rico en factores que han sido asociados con la reparación de heridas en mucosa oral. Histatina-1 es un péptido pequeño, considerado como uno de los principales factores salivales que contribuyen a la re-epitelialización de heridas. Sin embargo, su participación en otras fases de la reparación de heridas, como la angiogénesis, no ha sido establecida. En este trabajo investigamos el efecto de Histatina-1 salival y sintética sobre la adhesión y migración de células endoteliales, así como en el potencial angiogénico de células endoteliales, y la activación del eje de señalización RIN2/Rab5/Rac1. Materiales y métodos: Se usó la línea celular EA.hy 926, y el cultivo primario de células endoteliales de cordón umbilical humano, HUVEC. La migración celular fue evaluada en ensayos de cierre de heridas y de transmigración en Cámara Boyden. La adhesión celular sobre matriz de fibronectina fue determinada por tinción con cristal violeta, y mediante video-microscopía de células vivas. Los niveles de Rab5- GTP y Rac1-GTP fueron evaluados por medio de ensayos de precipitación por afinidad (pull-down). La participación de las proteínas de señalización RIN2, Rab5 y Rac1, fue evaluada por inmunofluorescencia y microscopía confocal, ensayos de migración en Cámara Boyden y en experimentos de transfección con las mutantes inactivas de Rab5 y Rac1, GFP-Rab5/S34N y GFP-Rac1/T17N, respectivamente. La morfogénesis vascular fue valorada por medio de ensayo de formación de capilares in vitro. Finalmente, la relevancia de Histatina-1 salival en la migración endotelial fue evaluada por medio de una inmunodepleción de Histatina-1 salival. Resultados: Los resultados expuestos en este trabajo indican que Histatina-1 promueve la adhesión y migración de células endoteliales a través del eje RIN2/Rab5/Rac1, y más aún, que Histatina-1 actúa como un factor promotor de la morfogénesis vascular in vitro. Finalmente, observamos que la saliva humana por medio de Histatina-1, es capaz de promover la migración celular endotelial. Conclusión: Estos resultados establecen a Histatina-1 como un nuevo factor pro-angiogénico. Lo anterior, sumado a estudios previos, permitiría proyectar a Histatina-1 como un posible coadyuvante en el tratamiento de patologías con alteración en la reparación de heridas.