Efecto del ADN de Porphyromonas endodontalis sobre el fenotipo inflamatorio y participación de TLR -9 en macrófagos humanos
Professor Advisor
dc.contributor.advisor
Hernández Ríos, Marcela
Author
dc.contributor.author
Lucero Mora, Joaquín Andrés
Associate professor
dc.contributor.other
Reyes Rojas, Montserrat
Associate professor
dc.contributor.other
Hoare Teuche, Anilei
Admission date
dc.date.accessioned
2024-10-03T19:16:45Z
Available date
dc.date.available
2024-10-03T19:16:45Z
Publication date
dc.date.issued
2023
Identifier
dc.identifier.other
10.58011/n2p9-ds50
Identifier
dc.identifier.uri
https://repositorio.uchile.cl/handle/2250/201310
Abstract
dc.description.abstract
Introducción: La periodontitis apical es una condición osteolítica inflamatoria-infecciosa que afecta al
periodonto apical. Si bien, Porphyromonas endodontalis es un patógeno clave, definido en base a su
prevalencia y factores de virulencia, se desconoce el efecto del ácido desoxirribonucleico (ADN) de
Porphyromonas endodontalis en la respuesta inflamatoria mediada por Porphyromonas endodontalis,
así como los receptores involucrados en su reconocimiento y la posible interacción potencial entre
ellos.
Objetivo: Evaluar in vitro si el ADN de P. endodontalis induce una respuesta proinflamatoria
mediada por TLR-9 en macrófagos humanos.
Metodología: Macrófagos diferenciados de monocitos humanos de línea THP-1 fueron
estimulados con ADN (100 μg ml−1) de aislado clínico endodóntico o una cepa de referencia de
Porphyromonas endodontalis. Se determinó la expresión génica de TNF-α , IL-1β, IL-6, IL-12, IL-10,
y TLR-9, -2 y -4 por RT q-PCR. Los niveles de activación de NF-kB se determinaron mediante la
fosforilación de la subunidad p65 por Inmuno Western blot y su traslocación al núcleo, usando
inmunofluorescencia. Finalmente se evaluó la participación de TLR-9, 2 y 4 mediante el uso de un
inhibidor de TLR-9 (ODN INH-18; 1 µM) y un inhibidor de TLR-2 y 4 (OxPAPC; 30 μg ml−1). Como
control negativo se utilizaron células sin estimular expuestas a medio sin ADN de P. endodontalis .
Como control positivo se utilizó un agonista de TLR-9 (ODN 2006; 2,5 µM). Cada experimento se
realizó 3 veces y en triplicado. El análisis estadístico de los resultados se realizó por la prueba de
ANOVA o Kruskal-Wallis según la distribución de los datos.
Resultados: Los macrófagos estimulados con ADN de la cepa de referencia P. endodontalis ATCC
35406 indujeron aumento de mRNA de TNF-α e IL-6, mientras que el aislado clínico indujo aumentos
de mRNA de TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10 por encima del control sin estimular. Respecto de la
participación de TLR-9 en la respuesta inflamatoria inducida por el ADN de P. endodontalis, si bien no
se observaron cambios en los niveles de mRNA de TLR-9, el ADN de P. endodontalis indujo la
activación de NF-kB vía TLR-9, la que fue más marcada para el aislado clínico. Además, existió
participación de TLR-9 en la expresión génica de IL-6 por ADN de ATCC 35406 y del aislado clínico
de P. endodontalis. Nuestros resultados sugieren también la participación TLR-2 y 4 en la respuesta
inducida por ADN de P. endodontalis, lo que se evidenció en la disminución de la expresión de TNF-α,
IL-1β e IL-6 al inhibir estos receptores.
Conclusión: El ADN de P. endodontalis induce una respuesta proinflamatoria mediada por TLR-9 y
señalización vía NF-kB, e involucraría la participación de TLR-2 y/o 4 en macrófagos humanos.
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Laboratorio de Biología Periodontal, Facultad de Odontología, Universidad de Chile.
Financiamiento: FONDECYT 1200098
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Universidad de Chile
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Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States