Presencia de IFN-γ, IL-6, IL-4 y FXIII-A como marcadores indirectos de la vía de activación clásica y alterna de los macrófagos, en pacientes con periodontitis

Abstract

La periodontitis crónica es una patología infecciosa, causada por un complejo de especies bacterianas, que afecta principalmente los tejidos de inserción de los dientes. La respuesta inmuno-inflamatoria generada por esta enfermedad, se caracteriza por la presencia de un infiltrado inflamatorio, en el cual, los macrófagos representan entre 5 al 30%. Estas células participan en la respuesta contra microorganismos, fagocitosis, producción de citoquinas y presentación de antígenos, para lo cual, deben activarse. Existen dos vías de activación: Clásica y Alterna, las que son reconocidas mediante marcadores indirectos de los cuales, IFN-γ, IL-6 (vía clásica) e IL-4 (vía alterna), han sido ampliamente abordados. Recientemente, se ha descrito al Factor XIII-A como un buen marcador de la vía alterna. Si bien las vías de activación de los macrófagos han sido ampliamente estudiadas, no existen estudios al respecto en periodontitis. El objetivo de esta investigación fue determinar las vías de activación de los macrófagos presentes en periodontitis, mediante la detección de los marcadores indirectos de la vía de activación clásica IFN-γ e IL-6 y de la vía de activación alterna FXIII-A e IL-4. Para tal efecto, se seleccionaron 35 pacientes con periodontitis crónica que tenían al menos 14 dientes y 35 sujetos periodontalmente sanos, como grupo control. Posteriormente se evaluaron y registraron los parámetros clínicos (PS, NIC, SS e IP), en 6 sitios por diente y se obtuvieron las muestras de tejido gingival desde los sitios periodontales con PS ≥ 5mm y NIC ≥ 3mm, en los sujetos con periodontitis y durante extracción de terceros molares, en los pacientes sanos. Una vez obtenidas las biopsias, fueron procesadas y analizadas para determinar presencia de IFN-γ, IL-6, IL-4 y FXIII-A, a través de Western Blot e Inmunohistoquímica, cuantificándose posteriormente la expresión de los marcadores obtenida con esta técnica y también mediante ELISA, comparandolos entre sujetos sanos y con periodontitis. Posteriormente los resultados de IL-6 y FXIII-A, también fueron analizados en pacientes con periodontitis moderada y severa. Finalmente, se aplicaron los test estadísticos pertinentes a los resultados obtenidos. Se detectó la presencia de macrófagos mediante CD68+ solo en Inmunohistoquímica y de sus marcadores IFN-γ, IL-6, IL-4 y FXIII-A mediante Western Blot e Inmunohistoquímica, en todas las muestras de pacientes sanos y con periodontitis. En cuanto a la distribución topográfica, los marcadores IL-6, IL-4 y FXIII-A presentan diferencias estadísticamente significativas entre las muestras de tejido gingival sano y enfermo, siendo mayor en éste último. Los niveles de expresión también presentan diferencias significativas, donde la concentración de IL-6 (7.0215 (2.553) versus 99.5745 (126.383); p = 0.0001) e IL-4 (1.056 + 0.4882 versus 1.562 + 0.4713; p = 0.0299), es mayor en pacientes con periodontitis y FXIII-A (94.96 + 18.38 versus 69.68 + 21. 43; p = 0.011), es mayor en sujetos sanos. No existen diferencias entre las muestras de pacientes con periodontitis de distinta severidad para IL-6 (79.53 + 49.64 versus 108.7 + 83.76; p = 0.4112) y FXIII-A (59.39 + 17.41 versus 70.30 + 23.63; p = 0.3109). Los resultados sugieren que al estar presente IFN-γ, IL-6, IL-4 y FXIII-A en pacientes sanos y con periodontitis, los macrófagos serían activados por ambas vías en salud y enfermedad periodontal