Cuantificación de la biomasa del microbioma subgingival durante el transcurso de periodontitis experimental

Abstract

La periodontitis es una enfermedad inflamatoria multifactorial asociada a una disbiosis del microbioma subgingival, caracterizada por la destrucción de los tejidos de soporte del diente. Debido a lo anterior, el microbioma subgingival ha sido un blanco de estudio a lo largo del tiempo para caracterizar de mejor manera su rol en periodontitis. A raíz de esto es que han surgido diferentes modelos experimentales de periodontitis, sin embargo, el modelo de periodontitis inducido por ligadura ha demostrado ser un modelo de elección a la hora de estudiar carga bacteriana total debido a que nos permite generar una acumulación bacteriana en relación con la sutura, que produce una inflamación local y finalmente la pérdida de hueso alveolar. Además, permite recolectar muestras biológicas en distintos puntos de tiempo. A la fecha aún no existen suficientes antecedentes para establecer la dinámica del aumento de la carga bacteriana total (CBT) en la transición de salud a enfermedad. El objetivo de este trabajo fue cuantificar secuencialmente la CBT durante periodontitis inducida por ligadura y establecer su correlación con la pérdida ósea alveolar. Metodología: En ratones de la cepa C57BL/6 se realizó el modelo de periodontitis inducido por ligadura (PIL). Se recolectó la ligadura en distintos tiempos experimentales, 2 horas, día 1, 3, 5 y 7 post-colocación de la ligadura. Se extrajo el ADN proveniente de las ligaduras usando una versión modificada de DNeasy Blood and Tissue kit (Qiagen). Posteriormente, se realizó un ensayo PCR en tiempo real, para cuantificar el gen 16S rADN utilizando un ensayo TaqMan previamente publicado. La pérdida ósea se registró de forma morfométrica en 6 sitios predeterminados. Como análisis estadístico, se determinó la distribución de los datos mediante el test de Shapiro-wilk, y se utilizó el test de Kruskall-Wallis y la correlación de Spearman. Resultados: Se observa un aumento temprano de la carga bacteriana total, el cual es significativo a partir del día 3 y tiende a mantenerse hasta el día 7. En cuanto a la pérdida ósea se observa que esta es significativa a partir del día 5 post-ligadura. Además, determinamos que la CBT de correlaciona de forma positiva con la pérdida ósea. Conclusiones: Se observa aumento significativo temprano de la CBT en la transición de salud a enfermedad, la cual se correlaciona de forma positiva con la pérdida ósea, lo que tiene un papel esencial en la patogénesis de la periodontitis experimental.