Detección de Porphyromonas gingivalis en cerebro de ratas Sprague-Dawley afectadas de periodontitis experimental

Abstract

La periodontitis es una patología de naturaleza inflamatoria crónica multifactorial, una de las patologías más prevalentes en la cavidad oral y es causada por microbiota subgingival disbiótica conformada por una gran variedad de bacterias. Una de ellas corresponde a Porphyromonas gingivalis, patógeno clave asociado al inicio y progresión de la enfermedad periodontal, pudiendo además afectar a otros tejidos. Diversos estudios han confirmado la relación entre diferentes infecciones microbianas, el deterioro cognitivo y la enfermedad de Alzheimer (EA), estipulando un posible origen infeccioso. Además, recientemente se ha detectado a P. gingivalis en el cerebro de individuos que fallecieron y estaban afectados de EA. Debido a ello es necesario determinar si P. gingivalis puede ser detectada en distintos tejidos cerebrales y no cerebrales de ratas Sprague-Dawley wild-type afectadas de periodontitis experimental inducida por inoculación monoinfecciosa de los distintos serotipos capsulares y cepas no encapsuladas de P. gingivalis. Objetivo: Determinar si mediante la inoculación palatina de los distintos serotipos capsulares o la cepa no encapsulada de P. gingivalis es posible detectar la bacteria en sitios extraorales en ratas Sprague-Dawley wild-type. Materiales y métodos: Se utilizaron 30 ratas Sprague-Dawley wild-type macho de 4 semanas de edad, a las cuáles se les indujo periodontitis experimental mediante la inoculación palatina de los distintos serotipos capsulares de P. gingivalis. Para esto, a un total de 30 ratas se les inoculó 100 μL del serotipo K1 (6), K2 (6), K4 (6) y la cepa mutante carente de cápsula GPA (6). En el caso del grupo control negativo de inyección (Sham) se inyectaron 100 μL de medio de cultivo sin bacterias (6). Luego de 55 días desde la primera inoculación de las bacterias todas las ratas se eutanasiaron según las muestras a aislar. Se obtuvieron muestras biológicas de sangre periférica, hipocampo, corteza cerebral y líquido cerebro-espinal (LCE) para cuantificar la presencia de gingipaína RgpA, el gen 16S DNA de P. gingivalis y los genes rgpA y kgp mediante qPCR y citometría de flujo, e identificar P. gingivalis mediante inmunofluorescencia. Los datos se analizaron estadísticamente usando el software SPSS v.15.0 (Lead Technologies Inc., Charlotte, NC, USA). Resultados: En todas las muestras biológicas se detectó un incremento en la carga bacteriana de P. gingivalis, en la detección de los genes rgpA y kgp y en la cuantificación de gingipaína RgpA de las ratas inoculadas con los distintos serotipos de P. gingivalis en comparación con las ratas sham, sin diferencias significativas entre los distintos serotipos. Todos los serotipos bacterianos fueron capaces de invadir el cerebro de las ratas Sprague-Dawley wild type. Conclusiones: Estos datos sugieren que todos los distintos serotipos de P. gingivalis (K1, K2, K4 y la cepa no encapsulada GPA), pudieron ser detectados en tejidos extra-orales de ratas Sprague-Dawley wild type mediante distintas técnicas moleculares.